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利用免疫聚合酶链反应探讨HBsAg阴性 HBV DNA阳性的形成原因 |
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CR污染。免疫PCR阳性的2例单项抗-HBc(+)和3例伴其它抗原抗体的抗-HBs(+)患者1～3个月后复查HBV血清标志时HBsAg(+)。
表2 免疫PCR检出HBsAg与HBV血清标志的关系
项 目 例数 immuno-PCR
阳性例数 阳性率(%)
无HBV标志 1 0 0
单项抗-HBs(+) 4 0 0
抗-HBs(+)/HBsAg或抗-HBc(+) 8 6 75**
单项抗-HBc(+) 5 3 60*
HBsAg(+)和/或抗-HBc(+) 5 3 60*
*后三组合并与单项抗-HBs(+)χ2统计，Fisher精确概率为0.0287；
**与单项抗-HBs(+)χ2统计，Fisher精确概率为0.0303
六、SSCP分析
6例患者双份血清为HBV DNA(S区引物)阳性。PCR产物为522bp，占S基因62.7%，包含了HBsAg主蛋白的主要抗原决定簇(氨基酸残基117～147)。以前后血清对比的方式进行SSCP分析发现，仅1例患者为SSCP阳性。
讨论
免疫PCR是目前检测抗原抗体最敏感的方法。用它来检测血清中的抗原时，敏感性高于ELISA约103倍［2］，检测血清中的HBsAg则可达0.5pg/L［3］。本研究发现，免疫PCR的敏感性也高于RIA法约5～125倍，应用于评价HBsAg(-)/HBV DNA(+)的形成原因也获得满意结果。因此，免疫PCR因其突出的高敏感性而有着广泛的应用前景。23例HBsAg(-)/HBV DNA(+)的患者中，12例免疫PCR检测为阳性，阳性率为52.2%。与原乙型肝炎标志(HBSAg、抗-HBS、HBeAg、抗-HBe、抗-HBC)比较发现，免疫PCR检测的阳性病例主要为单项抗-HBc(+)或抗-HBs(+)伴其它抗原抗体患者。因此，HBV感染的恢复早期，即抗-HBs(+)形成早期使HBsAg处于低水平是ELISA出现假阴性的主要原因。
肝病患者中HBsAg(-)/HBV DNA(+)的流行率为25%［4］，较本研究的流行率(5.1%，23/452)高。目前认为HBsAg(-)/HBV DNA(+)的形成原因是处于HBV感染恢复期和HBV基因突变［6，7］。但有关HBV基因突变的报道仅为横向比较，缺乏个体自身的前后纵向比较［6，7］，因此，无法区分基因突变和变异株感染。“a”决定簇的突变在HBsAg阳性与阴性患者中的频率差异无显著性［6］，因此，基因突变在HBsAg(-)/HBV DNA(+)形成中意义尚需进一步探讨。本研究结合免疫PCR对临床检查中出现HBsAg(-)/HBV DNA(+)的原因进行了全面分析。发现43.5%(10/23)的血清为ELISA的敏感性不高造成，56.5%(13/23)有可能是HBV DNA检测中的假阳性。进一步纵向比较6例患者的双份血清发现，S基因的主要抗原决定簇仅1例存在突变。因此，处于HBV感染恢复期是临检HBsAg(-)/HBV DNA(+)的原因之一，而突变可能不是主要原因。进一步增加病例数，延长随访时间可最终阐明这一问题。
PCR假阳性的主要原因是污染，PCR的污染问题似乎是较难控制的普遍问题，常规设立一个阴性对照不足以完全排除PCR的假阳性［8］。在大规模、长期的临床检验中，污染的问题更为突出。我室采用严格的措施控制污染，但仍存在低水平的污染。
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