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骨关节炎滑膜细胞间粘附分子 |
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美国Santa公司产品。ICAM-1抗体：单克隆抗体，为美国ZYMED公司产品。过氧化物酶标记的链霉卵白素染色试剂盒(SP染色试剂盒)为美国ZYMED公司产品。
1.2 标本收集：滑膜组织58例来自解放军总医院，均为手术活检标本。滑膜一经取出后用石蜡包埋，以保存备用。其中OA组织40例，RA组织18例。OA诊断均同时具备下列两个条件：①前一个月大部分时间膝或髋关节痛；②关节边缘有骨赘。RA诊断均符合美国风湿病协会1987年RA诊断标准。
1.3 方法：采用SP免疫组织化学技术检测。染色步骤：切片常规脱蜡至水，用10%正常羊血清室温封闭10分钟，然后依次加入一抗，生物素标记的二抗，辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素，DAB-H2O2溶液，最后苏木素复染，封片观察结果。每个步骤间用PBS冲洗5分钟×3次。对照实验：用PBS代替一抗、二抗和辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素，其余步骤不变，作为阴性对照。结果判定在高倍镜下进行。淡棕黄色染色为轻度阳性，棕黄色为中度阳性，深棕黄色为强阳性。无黄色为阴性。
2 结 果
ICAM-1在滑膜组织中的表达(图1～图3)：ICAM-1阳性细胞分布于滑膜衬里层和滑膜下层。多数巨噬细胞样细胞的胞浆中充满深黄色阳性颗粒，呈颗粒状或团块状分布，胞核染色阴性，少数滑膜衬里细胞和血管内皮细胞呈轻度阳性。部分成纤维细胞的胞浆及胞核中有散在的阳性颗粒，淋巴细胞均为阴性。在32/40例OA和16/18例RA的滑膜组织有ICAM-1的表达。RA滑膜ICAM-1表达程度与OA基本相同，但阳性程度和分布范围高于OA滑膜。
TGF-β1在滑膜组织中的表达(见图4、图5)：TGF-β1阳性细胞分布于滑膜衬里层和滑膜下层，TGF-β1表达于滑膜组织巨噬细胞样细胞，滑膜衬里细胞和成纤维细胞样细胞。阳性产物在胞浆内呈颗粒样分布。多数巨噬细胞样细胞呈强阳性染色，位于血管周围的巨噬细胞样细胞阳性程度明显增强，淋巴细胞之间的巨噬细胞呈中度阳性，淋巴细胞和血管内皮细胞无阳性染色。TGF-β1在31/40例OA和15/18例RA滑膜组织中表达。RA滑膜TGF-β1染色分布和强度与OA相似。
对照实验：阴性对照染色为阴性反应。
3 讨 论
ICAM-1是一种单聚体细胞表面糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily)，通过与其配体相互作用参与机体免疫和炎症反应，已有研究表明，ICAM-1介导炎症细胞进入关节滑膜组织〔1〕，RA滑膜有ICAM-1表达〔2，3〕，用针对ICAM-1单克隆抗体治疗慢性RA获得临床表现改善〔4〕，认为ICAM-1参与RA的发病过程。既往认为OA是一种非炎症性关节疾病。近年来发现OA滑膜有炎症改变，其滑膜查出炎症因子如IL-1、TNFα。体外实验证明这些细胞因子可诱导滑膜表达ICAM-1〔5〕，OA滑膜衬里细胞和滑膜下层细胞表达ICAM-1〔3〕。本文研究表明OA滑膜组织巨噬样细胞、滑膜衬里细胞、成纤维细胞和血管内皮细胞表达ICAM-1，由此推测ICAM-1可能介导炎症细胞进入OA滑膜组织，通过免疫机制参与OA滑膜炎症反应。
本文结果还显示，OA滑膜组织ICAM-1的染色分布和强度比RA弱，这可能与临床上RA滑膜炎症反应改变程度较OA严重，ICAM-1在炎症滑膜组织表达增强有关。
TGF-β1具有抑制免疫反应的作用。可抑制B淋巴细胞的增殖和分化，抑制T细胞增殖，并且抑制单核细胞和巨噬细胞产生IL-1、IFN-γ和TNF。TGF-β1对鼠关节炎起保护作用〔6〕，Chu等〔7〕发现RA和OA滑膜组织表达TGF-β1，本文研究结果显示OA滑膜组织巨噬细胞样细胞、滑膜衬里细胞和成纤维细胞有TGF-β1的表达，由此推测TGF-β1对OA滑膜炎症可能起抑制作用。
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