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乙型肝炎病毒C基因逆转录病毒载体的构建及在永生化人外周血B细胞中的表达 |
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周福元 隋礼丽 骆抗先
【摘要】 目的 体外研究乙型肝炎病毒C(HBV/C)基因变异的生物学意义。方法 应用逆转录病毒载体pXT1构建HBV/C基因表达载体，并转染永生化人外周血B细胞使之稳定表达HBcAg。结果 重组质粒pXT1-HBV/C经聚合酶链反应(PCR)和BglⅡ及XhoⅠ双酶切鉴定均阳性，转染后的永生化人外周血B细胞PCR鉴定含目的DNA，流式细胞仪分析显示，约47.4%的细胞膜上表达了HBcAg。结论 HBV/C基因逆转录病毒表达载体有较高的转染效率，目的基因能在宿主细胞中稳定表达，有利于系列研究HBV/C基因变异的生物学意义。
【关键词】 肝炎病毒，乙型 变异 载体
Construction of hepatitis B virus C gene retroviral vector and its expression in immortalized human peripheral blood B cell lines
ZHOU Fuyuan, SUI Lili, LUO Kangxian.
Department of Infectious Diseases, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515
【Abstract】 Objective In order to study the biological significance of HBV/C gene variant in vitro. Methods Retroviral vector pXT1 was used to construct the HBV/C gene expression vector and the recombinant plasmid pXT1-HBV/C was used to transfect immortalized human peripheral blood B cell lines to express HBcAg steadily in the host cells.Results plasmid pXT1-HBV/C was detected positive by PCR as well as enzyme digestion with BglⅡ and XhoⅠ. Meanwhile, transfected cells was detected to contain HBV/C gene by PCR and HBcAg was expressed in 47.4% of the cells by means of flow cytometry. Conclusion Retroviral expression vector with HBV/C gene can transfect into eucaryotic cells effectively and express the goal gene steadily. The recombinant cells may be used in the systematic studies on the biological significance of HBV/C gene variant.
【Key words】 Hepatitis B virus Mutation Vector
乙型肝炎病毒(HBV)的核心抗原(HBcAg)是HBV特异性的杀伤性T淋巴细胞(CTL)的主要靶抗原，在乙型肝炎的发病机制中起着重要作用［1］。为研究HBV/C基因变异的生物学意义，我们采用逆转录病毒载体pXT1构建了HBV/C基因的表达载体，并在EB病毒永生化的人外周血B细胞中表达了HBcAg。
材料与方法
一、质粒pXT1
逆转录病毒表达载体pXT1由重庆医科大学任红教授惠赠，其结构示意图见图1。
BglⅡ和XhoⅠ：两个克隆位点；TK：单纯疱疹病毒胸苷激酶启动子；neo：新霉素抗性基因；SA、SD：分别为剪切受体和供体
图1 质粒pXT1的结构示意图
二、引物设计
5′端引物为P1： 5′-CGTAGATCTGGCTTTG-
GGGC[1] [2] 下一页
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