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重型丙型肝炎肝外组织丙型肝炎病毒感染状态免疫组化研究 |
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on Immunohistochemistry
现已证实外周血单个核细胞(PBMC)为丙型肝炎病毒(HCV)肝外复制部位之一，其与HCV致病机制及感染慢性化等可能有密切关系［1,2］。但对其它肝外组织研究甚少。我们采用免疫组化法研究了9例重型丙型肝炎患者肾、心、胰腺和肠等脏器内HCV多种抗原表达情况，并观察各组织病理改变，旨在探讨不同肝外组织内HCV感染状态、致病性及其意义。
材料和方法
一、研究对象和标本来源
9例重型肝炎患者，男8例，女1例，年龄25～48岁，系第三军医大学西南医院传染科1986～1994年收治并经尸体解剖(尸解)病理诊断证实的病例。按1995年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准［3］，计慢性重型肝炎6例，亚急性重型肝炎3例。9例经血清学(抗-HCV)、肝组织内HCV RNA和抗原检测证实为HCV感染者；均合并HBV感染。主要因肝性脑病(4例)、消化道大出血(4例)和肝肾综合征(1例)死亡。患者肾、心、胰腺和肠(5例)等共32份标本取自尸解组织存档石蜡块(由第三军医大学病理解剖教研室提供)。
二、实验方法
采用链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接法(S-P法)检测组织内HCV NS3、NS5和CP10。主要试剂有抗-HCV CP10单克隆抗体(McAb)，合成肽CP10偶联牛血清白蛋白免疫小鼠制备，由第三军医大学西南医院全军传染病中心提供；抗-HCV NS3和抗-HCV NS5 McAb，重组抗原免疫小鼠制备，由北京医科大学肝病研究所提供；S-P法试剂盒及3，3-二氨基苯联胺(DAB)显色试剂盒，为福州迈新生物技术开发公司产品，进口分装，即用型。特异性确证实验设：(1) 阳性对照；(2) 阴性对照(10份狂犬病尸解肝外组织，10份肝组织HCV抗原阴性患者肝外组织)；(3) 第一抗体和试剂替代对照。
结果
一、肝外组织内HCV多种抗原检出情况
9例中6例(66.7%)涉及21份(65.6%,21/32)肝外组织在细胞内检出HCV多种抗原(见表1)。同一患者不同肝外组织内抗原检出有良好的平行性。
表1 4种肝外组织内HCV多种抗原检出情况
组织 例数 NS3(+) NS5(+) CP10(+)
肾 9 6 5 4
心 9 5 4 4
胰 9 6 6 5
肠 5 3 2 0
肝 9 8 7 7
注：肝外和肝组织内HCV NS3、NS5和CP10抗原的检出呈显著或非常显著一致性(χ2=4.185～9.835和χ2=4.0598～7.2566,P＜0.05)；
实验中阳性对照为阳性结果；阴性组织对照和多种替代对照为阴性结果；分别采用三种McAb对同一肝外组织重复检测的结果亦完全一致。故本实验结果具有特异性、可靠性和敏感性。
二、肝外组织内HCV抗原表达
HCV NS3、NS5和CP10抗原阳性颗粒呈棕黄色、密集，定于肝外组织细胞浆内，呈均质型，包函体型和膜下型，未见核型。肾脏的肾小管上皮细胞、间质细胞(图1)和肾小球细胞内存在HCV抗原，以前两种细胞内常见，后者偶可见到。肾皮质内表达阳性细胞数量较髓质多。胰腺的腺泡细胞和腺导管上皮细胞(图2)，肠道的肠腺上皮细胞(图3)和心脏的心肌细胞(图4)内也可检出HCV抗原。
图1 HCV NS3阳性表达位于肾间质细胞浆内，呈棕黄色（↑指），均质型；点状分布；S-P法（DAB染色—下同）×400
图2 HCV NS5阳性表达位于胰腺导管上皮细胞浆内（↑指）；数个以上阳性细胞聚集；S-P法×400
图3 HCV CP10阳性表达位于肠腺上皮细胞浆内（↑指）；阳性细胞呈不规则小片状；S-P法×400
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