|
NOD小鼠口服胰岛素对胰岛Fas及其配体表达的影响 |
| |
【Key words】 Immune tolerance NOD mice Fas Fas ligand
(Chin J Endocrinol Metab, 1999,15：72-76)
已经证实1型糖尿病是T淋巴细胞介导的以胰岛素分泌细胞破坏为主的自身免疫反应性疾病，多种自身抗原与致病有关，包括胰岛素，GAD65，热休克蛋白(Hsp)等。给NOD小鼠口服这些抗原可阻止或延缓糖尿病的发生〔1-3〕。NOD小鼠其胰岛炎和糖尿病的发生和人类发生1型糖尿病的免疫过程相类似，因此是研究人类1型糖尿病理想的动物模型。
Fas和Fas配体(FasL)是细胞膜蛋白，介导靶细胞与T淋巴细胞，靶细胞自身之间的细胞凋亡，FasL表达较多的组织均为一些免疫特权部位如睾丸，因而认为FasL的表达可对组织起保护作用〔4〕。
本文的主要目的：(1)观察口服胰岛素对NOD小鼠糖尿病和胰岛炎发生情况的影响；(2)通过免疫组化染色来观察口服免疫耐受后胰岛Fas和FasL表达的改变情况。
材料和方法
一、NOD小鼠：购自中国医学科学院实验动物研究所，在该所通风无菌的环境下饲养。一般情况下雌性NOD小鼠30周龄糖尿病的累积发病率为60%～80%，40周龄时可达90%；雄性40周龄的累积发病率为10%～60%。只有雌性入选本实验。
二、口服胰岛素治疗：5周龄NOD小鼠64只随机分为两组：一组(34只)给予胰岛素每只1mg溶于500μl磷酸缓冲液(PBS)(1.7mmol/L KH2PO4，5mmol/L Na2HPO4，150mmol/L NaCl，pH 7.4)中，对照组(30只)给PBS 500μl，第1周给药两次，以后每周给药一次至30周。采用圆头注射针灌胃。分别于12、16和20周龄时处死各4～5只小鼠以检测各种指标，最后观察糖尿病发病率的小鼠数各为19只和18只。胰岛素为基因重组人胰岛素，由吉林通化安泰生物技术公司惠赠。
三、糖尿病的检测：12周以后每周用尿糖试纸测尿糖一次(苏州第一制药厂生产)，尿糖阳性者测尾静脉血糖，血糖仪为强生ONE TOUCHⅡ，血糖连续两周大于16.6mmol/L诊断为糖尿病。
四、口服胰岛素对即时血糖的影响：5周龄NOD小鼠和喂饲胰岛素的25周龄小鼠各10只，分别给予1mg胰岛素加PBS 500μl和单纯PBS 500μl，于给药前和给药后2小时、4小时、8小时和24小时测定尾静脉血糖，小鼠在实验期间空腹状态。观察其对血糖的影响情况。
五、胰腺的组织学观察：断颈处死小鼠，解剖后取胰腺，10%中性福尔马林固定。石蜡包埋，5μm厚切片，HE染色，光镜下观察。胰岛炎共分五级：0级：胰岛周围无淋巴细胞浸润；1级：胰岛周围有局部淋巴细胞浸润；2级：胰岛周围有较多淋巴细胞浸润其范围不超过1/3；3级：胰岛周围有大量淋巴细胞浸润范围在1/3～1/2；4级：胰岛周围有大量淋巴细胞浸润范围大于1/2。
六、胰岛素Fas和FasL免疫组化染色：每张病理切片均作Fas和FasL的单个染色，然后行Fas和FasL双染色。兔抗Fas和FasL多克隆抗体及免疫组化双染试剂盒均为美国Zymed Lab公司产品，操作步骤按试剂盒说明。
结果
一、口服胰岛素后明显抑制糖尿病的发生，胰岛素组26周时方出现糖尿病而PBS组14周开始出现糖尿病，26周发病率已达到79%(表1)。
表1 雌性NOD小鼠口服基因重组人胰岛素防止糖尿病发生情况
Tab 1 Prevention of diabetes by oral recombinant human insulin in female NOD mice
组别
Group 例数
n 糖尿病发病率(%)
Incidence of diabetes (%)
14周
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 2型糖尿病患者的脂蛋白 a 浓度和载脂蛋白 a 分型
下一个医学论文： 参麦注射液对骨关节炎模型动物关节液中白细胞介素
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 内科论文 >> 正文