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甲状腺疾病时甲状腺组织性激素受体的免疫组织化学研究 |
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激素受体(ER)和孕激素受体(PR)。最近有人用免疫组织化学方法证实了这种研究，但研究例数较少，且各种研究结果不尽相同〔1-3〕。本研究应用免疫组织化学方法检测不同甲状腺疾病的甲状腺组织中性激素受体的存在情况及其定位及分布状况。目的在于了解性激素受体与甲状腺疾病的关系以及性激素在甲状腺疾病发病过程中的可能作用。从而为甲状腺疾病尤其是甲状腺癌的激素治疗提供理论依据。
材料和方法
一、标本来源
标 本来自北医一院病理科及 外院会诊病例，共90例。其中甲状腺乳头状腺癌30例(男14例，女16例)，甲状腺滤泡状腺癌8例(男3例，女5例)，甲状腺腺瘤27例(男10例，女17例)，结节性甲状腺肿14例(男6例，女8例)，桥本甲状腺炎11例(男4例，女7例)。另取甲状腺腺瘤周围正常甲状腺组织8例(男4例，女4例)作对照。
二、主要试剂及染色方法
一抗分别为兔抗雄激素受体、兔抗雌激素受体和兔抗孕激素受体，二抗为生物素标记的羊抗兔抗体，ABC免疫染色试剂盒，均为Santa Cruz公司产品，购自中山生物技术有限公司。免疫组化染色采用ABC过氧化物酶法。简述如下：石蜡切片厚5μm，经二甲苯和梯度乙醇脱蜡脱水，用3% H2O2水溶液作用10分钟除去内源性过氧化物酶的活性，蒸馏水冲洗后用0.4%胃蛋白酶32～33℃作用10分钟，蒸馏水冲洗，切片浸入枸橼酸缓冲液(0.1 mmol/L,pH 6.0)于微波炉92～98℃修复抗原10分钟，室温冷却10分钟，磷酸缓冲液(PBS)冲洗，用阻断血清封闭20分钟以减少非特异性染色，加入一抗在湿盒中4℃过夜，PBS洗涤后，加入生物素标记的二抗室温孵育30分钟，PBS冲洗，加入ABC复合物室温孵育30分钟，最后在二甲氨基偶氮苯(DAB)溶液中显色5～15分钟，在显微镜下控制显色时间。PBS洗涤，苏木精复染，梯度乙醇脱水，封片观察。
三、对照实验
空白对照，用PBS分别取代一抗、二抗。阳性对照片ER、PR为已经证实这两种受体阳性的乳腺癌组织，AR阳性片为前列腺组织。
四、结果判断标准
在细胞的胞膜、胞浆或胞核有棕黄色颗粒分布即为阳性细胞。阳性病例为阳性细胞数占整个切片细胞总数的25%以上。结果分析采用直接概率及χ2检验。
结果
一、AR、ER、PR的分布特征
ABC过氧化物酶法染色性激素受体以棕黄色颗粒在甲状腺滤泡细胞的胞浆内分布为主，胞膜和胞核也有(图1～3)。在正常甲状腺组织细胞中均有少量的性激素受体阳性颗粒。各种甲状腺疾病的性激素受体阳性染色率不同。甲状腺组织中性激素受体的阳性染色深浅不一，分布不均，呈灶状或弥漫性分布。
图1 乳头状腺癌组织的ER染色。阳性颗粒定位在细胞浆，×400
Fig 1 Immunohistochemical staining of ER for papillary carcinoma. Specific staining for ER is located principally in the cytoplasm of cancer cells, ×400
图2 乳头状腺癌组织的AR染色。阳性颗粒定位在细胞浆，×400
Fig 2 Immunohistochemical staining of AR for papillary carcinoma. Specific staining for AR is located principally in the cytoplasm of cancer cells, ×400
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