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血管紧张素转换酶抑制剂对糖尿病大鼠肾皮质细胞膜胰岛素受体的调节 |
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icantly down-regulate its expression. Conclusion Benazepril may down-regulate the increased expression of renal cortex cell membranes insulin receptor protein in diabetic rats, which may be one of the important mechanism of its nephroprotection.
【Key words】 Angiotensin converting enzyme inhibitors Diabetes mellitus Renal cortex Insulin receptor Rat
(Chin J Endocrinol Metab, 1999,15：86-89)
糖尿病肾病(DN)是糖尿病特别是1型糖尿病病程中常伴有的严重并发症之一，其发生机制均直接或间接与高血糖有关。研究证实糖尿病状态下肝脏糖代谢严重障碍，肾组织糖代谢却异常活跃〔1〕。血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)对DN的保护作用已为大量的临床和实验所证实，然而，有关它对DN的保护作用是否涉及到对肾组织糖代谢的影响尚未见文献报道。胰岛素的生物效应由其靶细胞膜上胰岛素受体介导，已有的研究表明糖尿病状态下肾组织细胞膜胰岛素受体的数目和亲和力均存在明显异常。为此，本研究初步观察了一种ACEI制剂苯那普利(Benazepril)对糖尿病大鼠肾皮质细胞膜胰岛素受体蛋白表达的调节作用，旨在进一步探讨ACEI对糖尿病肾组织糖代谢影响的机制。
材料和方法
一、糖尿病模型建立
纯种雄性成年Wistar大鼠20只(购自上海计划生育研究所)，体重180～200g，所有大鼠均接受右侧肾切除术，2周后腹腔注射单剂量链脲佐菌素(STZ，Sigma公司)60mg/kg(溶解在10mmol/L枸椽酸缓冲液中，pH 5.5)，对照组仅注射等量的枸椽酸缓冲液，48～72小时后尾静脉采血用血糖仪测定血糖，当血糖≥16.7mmol/L，同时尿糖在以上确定为糖尿病模型。
二、动物分组及给药
随机分：(1)对照组(C组，6例)；(2)糖尿病组(D组，7例)；(3)糖尿病苯那普利治疗组(DB组，7例)。苯那普利粉剂(北京诺华制药有限公司提供)10mg.kg-1.d-1灌服，C与D组仅给予等量自来水灌服。4周末大鼠在空腹下尾静脉采血待测血糖及血胰岛素水平。次日在3%水合氯醛麻醉下行右侧颈动脉插管收集血标本，保存于-70℃冰箱中待测血肌酐及ACE活性；肾脏在腹主动脉插管下注入4℃预冷的生理盐水反复灌洗后，称重、分离皮、髓质，保存于-70℃冰箱中待测肾组织血管紧张素转换酶(ACE)活性及肾皮质细胞膜总蛋白提取。血糖、血肌酐水平由日立7150型全自动生化分析仪测得；血胰岛素水平采用放射免疫法测得。
三、血浆及肾皮、髓质ACE活性测定
参考Unger等〔2〕方法略加改进，由日立F-4000荧光分光光度计测得(EX360nm、EW486nm)，所需底物马尿酰-组氨酰-亮氨酸(Hip-His-Leu)、荧光激发物邻苯二醛及标准品组氨酰-亮氨酸(His-Leu,HL)均购自Sigma公司，酶活性单位表示为mmol HL.min-1.ml-1(血浆)或nmol HL.min-1.mg-1(组织)。
四、肾皮质细胞膜制备
肾皮质加裂解液〔1% SDS，100mmol/L Tris(pH 7.4)，100mmol/L sodium pyrophosphate, 100 mmol/L sodium fluoride, 10mmol/L EDTA, 10mmol/L sodium vanadate〕在沸水中高速匀浆(XHF-1高速分散器，上海益达生化仪器厂)30秒，取匀浆液再煮沸10分钟，然后冰浴40分钟后超速离心55 000rpm×60分钟，取上清液按改良Lowry法测定细胞膜总蛋白浓度。
五、免疫印迹(Western杂交)分析
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