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风湿性心脏病心肌中增殖细胞核抗原和 |
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sis. (2) Interstitial cells not only take part in interstitial fibrosis progress but also play a key role in vascular reconstruction. (3)The degree of PCNA positive expression and the areas of myocardium fibrosis were negative associated with cardiac function.
【Key words】 rheumatic heart disease proliferating cell nuclear antigen actins ventricular function
增殖细胞核抗原(PCNA)是真核细胞DNA合成所必须的一种核蛋白，近年来被用作原位检测细胞增殖状态的特异性抗体而用于肿瘤动力学研究［1］。有学者报道未成熟心肌和晚期衰竭心肌中有PCNA阳性表达［2,3］。α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)是一种细胞骨架蛋白,正常人心肌仅血管平滑肌细胞呈阳性表达。最近有报道肌纤维母细胞(MFb)也可表达α-SMA［4］,而MFb与器官纤维化关系密切,但与心肌纤维化的关系未见报道。本研究应用免疫组化及免疫电镜发现在风湿性心脏病（风心病）心肌组织中PCNA呈阳性表达、α-SMA在心肌间质中呈阳性表达,并将其表达率与手术前后左室心功能变化进行对比分析,以探讨心肌病变对心功能的影响。
资料与方法
1.材料来源: 38例病变标本选自我院1995年1月至1995年12月确诊为风心病、单纯二尖瓣病变,行二尖瓣替换术患者左室乳头肌（除外合并有主动脉瓣病变或合并有冠心病者）,其中男17例,女21例（年龄为39.7±9.4岁)。心功能Ⅲ级26例,Ⅳ级12例,病史5～30年。术前按二尖瓣瓣口面积及反流程度分为：（1）二尖瓣狭窄组16例（瓣口面积<1.2cm2,反流量<3ml)；（2）二尖瓣关闭不全组22例（瓣口面积>1.5cm2,反流量>6ml)，两组患者一般情况无统计学差异；（3）对照组(5例):取自意外死亡而无心肺疾病男性的左室乳头肌,年龄在22～48岁；（4）胎儿尸检标本对照组(5例):取自不同月龄的死胎左室乳头肌,月龄在3～7个月。鼠抗人α-SMA单克隆抗体为Sigma公司产品,鼠抗人PCNA单克隆抗体及S-P免疫组化试剂盒为Dako公司产品。
2.标本制备:病变组在手术中取材,对照组正常成年及胎儿乳头肌标本均在死后半小时内取材,标本被分成2份，1份立即放入10％福尔马林液中固定,常规石蜡包埋,连续切片厚3μm,分别作HE及免疫组化染色,另一份用含4％多聚甲醛和0.05%戊二醛的饱和苦味酸液中浸泡5小时,振动切片厚30μm,作包埋前漂浮染色。
3.检测指标和方法:(1)所有患者均于手术前和手术后6个月内应用二维超声心动图和彩色多普勒分别检查,测量左室各项心功能指标,包括左室心肌重量;(2)病理标本做免疫组化染色及免疫电镜观察。免疫组化染色及免疫电镜染色按SP法（链霉素亲生物蛋白-过氧化酶连接法）进行。电镜标本染色后常规经树酯包埋，高温聚合，光镜下取阳性部位作超薄切片，经醋酸双氧铀及柠檬酸铅双重电子染色后电镜下观察。
4.结果判定和记录: PCNA阳性以肝癌细胞为阳性对照,定位于细胞核;α-SMA以血管壁平滑肌细胞作阳性对照定位于胞浆。将免疫组化及HE染色切片在光镜下随机选取5个视野,图像输入自动图像分析仪,测量心肌纤维化面积与微动脉内、外径比值及阳性细胞数所占比例。PCNA阳性表达率参照Quaini等［5］判定方法,按每张切片中阳性心肌细胞数占全部心肌细胞数的百分比,分成Ⅳ级:≤25％为Ⅰ级; >25%～≤50％为Ⅱ级; >50%～≤75％为Ⅲ级; >75％为Ⅳ级。α-SMA阳性表达率判定方法,按每张切片中单位面积内α-SMA阳性细胞数分4级,<10个/mm2为Ⅰ级,10～30个/mm2为Ⅱ级,31～50个/mm2为Ⅲ级,>50个/mm2为Ⅳ级。α-SMA阳性细胞数所占比例,按随机选取5个视野将α-SMA阳性表达的血管周细胞和间质中肌纤维母细胞计数,计算各占多少比例的方法进行。每项指标分别计算出各组内的均数,所有结果均用上一页 [1] [2] [3] 下一页
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