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抗丙型肝炎病毒5 非编码区核酶在细胞内对病毒翻译启动的抑制作用 |
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贾战生 周永兴 冯志华 连建奇 李谨革 焦成松 李光玉 张文彬
【摘要】目的 研究抗丙型肝炎病毒(HCV)5′非编码区(NCR)双位点213和260核酶(Rz)在细胞内对HCV翻译 启动功能的抑制作用。方法 通过脂质体介导的基因转染方法，转染Rz基因和带荧光素酶(luc)的 靶基因真核表达载体于人肝癌细胞(HHCC)，应用液体闪烁计数仪检测luc报告基因的表达活 性。结果 Rz213和Rz260均能在HHCC细胞内有效地抑制luc基因的表达，其抑制 率在45%～70%之间，而针对两个不同切割位点的Rz之间无显著差异。结论 我们构建的Rz213和Rz260真核表达载体能在HHCC细胞内表达，并有 效地抑制HCV 5′NCR介导的翻译启动作用。
【关键词】肝炎病毒，丙型；核酶；基因治疗
Intracellular inhibition of viral gene expression by ribozymes against 5′-nonc oding region of hepatitis C virus
JIA Zhansheng ZHOU Yongxing FENG Zhihua et al.
(Center of Infectious Diseases,The Fourth Military Medical University,Xian 710038,China)
【Abstract】Objective To determine the effect of ribozymes 213 and 260 directed against 5′-noncoding region (5′-NCR) of hepatitis C virus (HCV) on viral gene expression in a human hepatic carcinoma cell (HHCC) line. Methods Cotransfection of pCMV NCR luc containing 5′-NCR-lu c f usion genes and eukaryotic vectors of ribozyme DNAs into HHCC was performed and the luciferase activity of reporter gene was measured by scintilation counter. Results 1)The pCMV NCR luc was efficiently expressed in HHCC;2)th e ribozymes 213 and 260 significantly suppressed the expression of HCV-luc by 45 ～70%, but there was no significant difference between the two ribozymes. Conclusion The ribozymes 213 and 260 against the HCV 5″-NCR can s ubstantially and specifically inhibit viral gene expression in HHCC.
【Key words】Hepatitis C virus； Ribozyme； Gene therapy
丙型肝炎病毒(HCV)5′非编码区(NCR)对病毒的复制、病毒蛋白的翻译和启动起重要的 调节作用［1］。我们以此为靶序列成功设计了抗HCV 5′NCR的213和260双位点锤头 结构核酶(Rz)，并构建了该Rz的真核表达载体［2］。为了观察该双位点Rz在细胞 内的作 用，本研究应用Alt等［3］构建的pCMVNCRluc为靶基因，以荧光素酶(luciferase,lu c)为报告基因，通过脂质体介导的基因共转染方法，研究了抗HCV 5′NCR Rz213和Rz260与 靶基因共转染对luc基因表达的抑制作用。
材料与方法
一、细胞培养
人肝癌细胞(HHCC)株由中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库引种，本校863研究室保存 ［4］。用含10%小牛血清RPMI 1640培养液，加青、链霉素，HEPEs,在5%CO2，37℃[1] [2] 下一页
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