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完全弗氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎和糖尿病的机理研究 |
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reated mice than that in NS-treated mice. Positive correlation was found between the positive rate of Bax oncoprotein in islet cells and the score of insulitis (r=0.613), and negative correlation between positive rate of HSP70 in islet cells and the score of insulitis (r=-0.913) was also revealed. Conclusion CFA can reduce insulitis severity and decrease incidence of diabetes in NOD female mice. CFA is able to inhibit the expression of Bax oncoprotein and induce the expression of HSP70 in islet cells.
【Key words】 Complete Freund s adjuvant Insulitis Diabetes mellitus NOD mouse Oncoproteins Heat shock proteins
(Chin J Endocrinol Metab, 1999,15:271-274)
NOD鼠是一种遗传性1 型糖 尿病的啮齿类动物模型，其发病机理为T细胞介导的胰岛β细胞进行性破坏和数量减少〔1〕。完全弗氏佐剂(complete Freund s adjuvant, CFA)为一种免疫调节剂，近年发现CFA能通过免疫调节作用预防NOD鼠胰岛炎和糖尿病的发生，但CFA作用机理尚未完全清楚〔2，3〕。Bax癌基因蛋白为促细胞凋亡蛋白〔4〕；热休克蛋白70(heat shock protein 70, HSP70)为一种保护性蛋白，具有抑制细胞凋亡作用〔5〕。本文应用免疫组化方法研究胰岛细胞Bax蛋白和HSP70的表达及意义。
材料和方法
一、材料
1.实验动物：NOD鼠从澳大利亚WEHI医学研究中心引进，由山西医科大学张志利教授提供。所有小鼠在标准饲养环境下喂养，自由饮净化水和全价营养颗粒饮食。本实验采用的NOD雌鼠群落在30周龄时糖尿病自然发病率为70%。
2.动物实验：10只4周龄NOD雌鼠随机分成CFA组和生理盐水组(NS组)，每组5只。CFA组给雌鼠后脚板注射50μl CFA，NS组注射等量NS。当发生糖尿病时或30周龄时处死小鼠，钝性分离全胰腺，置10%中性福尔马林液固定24～48小时，常规制成石蜡包埋切片，厚4μm。
3.主要试剂：CFA由美国生命技术公司进口，鼠抗人HSP70单抗(1/100)、兔抗人Bax蛋白多抗(1/100)、生物素标记羊抗鼠IgG或羊抗兔IgG(1/300)和ABC试剂盒(1/500)均购自Sigma公司，DAB-HCl为瑞士进口分装。
二、方法
1.胰岛炎评分：每例胰腺切2张不同切片(第一张切片后40μm再切第2张切片)，常规HE染色后光镜观察胰岛炎情况。参照Guytigco和Tisch评分标准〔6，7〕，每例鼠胰2张不同切片在低倍光镜随机移动，随机找到胰岛后高倍镜观察胰岛炎情况并评分，共观察10个不同胰岛，所得值0分示正常胰岛，1～2分示胰岛周围炎，3～4分示胰岛内炎(图1，2)。
图1 CFA组鼠，胰岛炎评分0分，属正常胰岛。HE染色，×100
Fig 1 Zero score of insulitis in CFA mice. Normal islet. HE stain, ×100
图2 NS组鼠，胰岛炎评分4分，属胰岛内炎。HE染色，×100
Fig 2 Score 4 insulitis in NS mice. In-insulitis HE stain, ×100
2.糖尿病检测：从10周龄始观察NOD鼠是否有糖尿病症状出现，当出现多饮、多尿、消瘦等症状时，用断尾法取血，用血糖仪测血糖，如果连续2天血糖值＞11.1mmol/L时诊断为糖尿病。无糖尿上一页 [1] [2] [3] 下一页
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