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冠心病和脑梗塞患者载脂蛋白B基因多态性研究 |
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sclerosis, AS）的各因素中，血脂代谢异常起重要作用。近年来，随着分子生物学技术和分子流行病学的发展，从基因和分子水平探讨载脂蛋白B基因多态性与动脉粥样硬化性心脑血管病的关系，已成为心血管疾病研究的重要课题。
近年来，多数研究认为载脂蛋白AI(apolipoprotein AI, apo AI)、载脂蛋白B(apo B)是指示冠状动脉粥样硬化风险度的良好指标［1］，国内外有学者开展血浆中apo AI, apo B含量及apo B基因多态性与AS、冠心病、心肌梗塞等疾病关系的研究，但其与动脉粥样硬化性脑梗塞(atherosclerotic cerebral infarction, ACI)的关系尚少报道。我们应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增技术，对apo B基因3′端可变数目串联重复序列（variable number of tandem repeats, VNTR）多态性在北京地区汉族人群，冠心病及脑梗塞患者中的分布特点及与血脂代谢各临床表现型的关系进行了对照研究，以期了解apo B基因3′VNTR与动脉粥样硬化性心脑血管病的关系。
对象与方法
一、研究对象选择和标准
1. 病例来源: (1)病例选自世界卫生组织心血管病监测方案(WHO MONICA——Beijing )冠心病和脑梗塞发病登记的回访病人及部分医院因急性心肌梗塞（恢复期）和脑梗塞（恢复期）的住院病例。(2)对照组选自国家“九*五”科技攻关项目人群，按照(WHO MONICA)方案危险因素调查标准［2］，从随机调查样本中收集体检健康人，血脂正常，排除心脑血管病、肝、肾、甲状腺疾病及糖尿病者。
2. 病例选择标准: 冠心病诊断符合世界卫生组织确定的诊断标准［3］，脑梗塞诊断按照全国第二届脑血管病学术会议修订的脑血管病诊断标准［4］，全部病例均经临床诊断和头颅CT扫描确诊。排除肝、肾、甲状腺疾病及糖尿病。
3. 分组: (1)冠心病组：125例患者，男114例，女20例，平均年龄(52.1±10.2)岁；(2)脑梗塞组：127例患者，男106例，女41例，平均年龄(53.0±14.0)岁。(3)健康对照组：178例，男120例，女58例，平均年龄(48.8±11.4)岁。
二、方法
1. 血脂类检测：空腹12～14小时后，周围静脉取血5ml，用2%乙二胺四乙酸1:9抗凝，室温下离心10分钟，取上层血浆测定脂质及载脂蛋白，血细胞用于提取染色体DNA。 胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)采用氧化酶法测定；高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)用磷钨酸镁法；低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)采用Fridewald公式计算； apo AI, apo B100为透射免疫比浊法。
2. 染色体DNA提取及扩增：将抗凝血按照低渗溶解红细胞方法提取基因组DNA。 采用PCR技术特异性扩增apo B基因多态性位点片段：3′端可变数目串联重复序列(3′VNTR)。引物参照文献［5］设计，由中国医学科学院基础所医学分子生物学国家重点实验室提供。
3. apo B基因3′VNTR等位基因长度的判定：取12μl PCR扩增产物以2%的琼脂糖凝胶电泳（70V，3～4小时）分离，以PBR 322/MSPI为标准分子量，紫外检测仪中观察结果并照像。测量每一条带至加样孔的泳动距离，在半对数坐标纸上绘出标准分子量曲线，根据此标准曲线找出同一排加样孔的样品分子量，计算如下式：
串联重复序列拷贝数=（片段bp-151 bp)/15 bp
所得串联重复序列拷贝数即为等位基因，不同的等位基因可以组合成不同的基因型。采用Ludwig等［6］命名法，以偶数命名（n=15 bp重复数）等位基因，由此可得到多种等位基因型。
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