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腺相关病毒和人 |
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朱海红 陈智 章明太 姚航平 丁列明
【摘要】 目的 观察腺相关病毒和人γ-干扰素的重组体pWIG转染淋巴细胞及在细胞内表达情况。方法 将pWIG以DNA-磷酸钙共沉淀法转染人淋巴细胞株H9，再分别用聚合酶链反应(PCR)、逆转录-PCR(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等方法在DNA、RNA和蛋白质水平研究该重组体导入细胞和在细胞内表达的情况。结果 转染pWIG的H9细胞的DNA和RNA经PCR和RT-PCR检测均有504 bp的DNA条带；用ELISA可测出γ-干扰素的表达量为17.2 pg/3×106细胞。结论 重组体pWIG用DNA-磷酸钙共沉淀法导入细胞后，转录HuIFN-γ mRNA，并翻译人γ-干扰素蛋白。为基因治疗的进一步研究打下基础。
【关键词】基因疗法；干扰素γ；腺相关病毒；淋巴细胞
Transfection and expression of the recombinant adeno-associated virus carrying human interferon-γ in human lymphocyte
ZHU Haihong, CHEN Zhi, ZHANG Mingtai, et al.
（Institute of Infectious Diseases,the First Affiliated Hospital,Medical college of Zhejiang University,Hangzhou 310003, China）
【Abstract】 Objective In order to study the transfection and expression of the recombinant pWIG of Adeno-associated virus and Human interferon-γ(HuIFN-γ) in human lymphocyte.Methods After transfecting pWIG into human lymphocyte via calcium phosphate, DNA, RNA and protein extracted from transfected cells were detected by polymerase chain reaction(PCR), reverse transcription PCR(RT-PCR) and ELISA. Results The 504 bp bands were detected from PCR and RT-PCR products of the DNA and RNA from the cells transfected, and HuIFN-γ protein were detected to be 17.2 pg/3×106 cells by ELISA.Conclusion The recombinant pWIG could produce HuIFN-γ mRNA after the transfection via calcium phosphate, and translate corresponding protein further. This lays ground for the further research of gene therapy.
【Key words】Gene therapy; Interferon γ; Adeno-associated virus; Lymphocyte
腺相关病毒(AAV)是目前基因治疗的常用载体系统之一。因其具有稳定表达、定点整合、安全性较高等优点而受到重视。我们在以往工作的基础上［1］，将已构建成功的腺相关病毒和人γ-干扰素(HuIFN-γ)基因的重组体pWIG转染源于人淋巴细胞的H9细胞株，在DNA、RNA、及蛋白水平探讨其表达状态。
材料和方法
一、材料
(一)DNA质粒和细胞株 pwp19载体由美国阿肯萨斯大学提供，为带有腺相关病毒末端反向重复序列的真核表达载体，详细资料参见文献［2］。重组体pWIG为本研究小组构建，是腺相关病毒载体p[1] [2] 下一页
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