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丙型肝炎病毒非结构蛋白3人源单链抗体的筛选与鉴定 |
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钟彦伟 成军 刘妍 董菁 杨继珍 张玲霞
【摘要】 目的 筛选、鉴定抗丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白(NS)3的人单链抗体(ScFv)，以解决鼠单抗的免疫原性问题，为HCV的基因治疗研究开辟新途径。方法 采用噬菌体表面展示技术，以重组的HCV NS3为包被抗原，从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮“吸附-洗脱-扩增”筛选过程，获得抗原结合活性较强的HCV NS3人单链抗体(ScFv片段)阳性克隆，并对其进行免疫及序列测定。结果 筛选出来的ScFv片段具有抗NS3的特异性。结论 利用噬菌体抗体库技术，成功获得HCV NS3人单链抗体ScFv片段。
【关键词】噬菌体展示技术；丙型肝炎病毒非结构蛋白3；亲和筛选；单链噬菌体抗体
Screening and characterization of human phage antibody with single-chain variable fragment specific to hepatitis C nonstructural 3 protein
ZHONG Yanwei, CHENG Jun, LIU Yan, et al.
（Gene Therapy Research Centre, Institute of Infectious Diseases, The 302nd Hospital of PLA, Beijing 100039, China）
【Abstract】 Objective Screening and characterization of human phage antibody with single-chain variable fragment (ScFv) specific to hepatitis C nonstructural 3 protein( NS3). Methods The recombinant phages were panned by NS3 coated in a microtiter plate and 66 clones were determined specific to NS3 after five rounds of biopanning. The specificity of single-chain variable fragment(ScFv) from the monoclonal antibody was determined by ELISA. Results NS3 phage antibody with ScFv has a specific combination character with hepatitis C virus NS3 antigen. Conclusion Human single chain antibody with ScFv specific to hepatitis C NS3 has been identified by means of the phage display technology.
【Key words】Phage display; Hepatitis C virus nonstructural 3 protein; Biopanning; Single-chain variable fragment phage antibody
丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白(NS)3是HCV基因组编码的一种最为重要的具有多种生物学活性的非结构蛋白质［1-3］。噬菌体展示技术，是近年来出现的一种新技术，它是将外源蛋白基因通过与丝状噬菌体外壳蛋白基因融合而将外源蛋白表达在噬菌体颗粒的表面，该技术将表型和基因型联系在一起，将识别相应抗原和进行再扩增的能力结合起来，不经人体免疫，绕过杂交瘤，仅仅通过几轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选富集过程，即可得到人源化的单链抗体［4，5］。
我们利用重组的HCV NS3为包被抗原，从噬菌体抗体库中筛选出了结合活性较强的HCV NS3人源单链噬菌体抗体，并对其进行了DNA序列测定。
材料和方法
一、材料
HCV NS3抗原为大肠杆菌表达的重组纯化抗原蛋白，纯度在95%以上。人噬菌体抗体文库为轻链可变区和重链可变区经甘氨酸接头(Gly4Ser)3连接的抗体文库［5］。M13K07购于Pharmacia公司[1] [2] 下一页
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