|
慢性乙型肝炎患者外周血T细胞受体基因重组的意义 |
| |
分子结构的改变，进而影响T细胞的免疫应答能力。因此，不同个体间的病情差异可能是由于T细胞对HBV应答的改变所致，而这种应答的改变可用TCR基因重组来反映。
材料与方法
一、研究对象
我院1994年3月至1997年11月住院的85例慢性乙型肝炎患者，男62例，女23例，平均年龄28.4岁。健康对照64例，男41例，女23例，平均年龄30.1岁。所有患者平行检测HBsAg、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc、抗-HBs、丙氨酸转氨酶(ALT)。
为了确定TCRβ基因重组与病程的关系，我们动态观察了19例患者。首份血TCRβ基因重组阳性者8例，TCRβ基因重组阴性者11例，共检测68次。随访时间1～37个月，每例患者最少检测2次，最多8次。
二、TCRβ基因重组检测［2］
每例采血10 ml，分离单个核细胞(其中含大量淋巴细胞)，用含有0.5%十二烷基硫酸钠(SDS)和蛋白酶K溶液消化，37℃过夜，然后用盐析法提取DNA［3］。DNA用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ消化(2U/μg DNA)，电泳后转印到Hybond-Nylon膜上(Amersham, Buckinghamshire, UK)，用紫外光固定，然后用32P-dCTP标记的TCRβ C1区cDNA探针杂交，65℃过夜。TCRβ C1区探针的标记采用随机引物法。杂交后Hybond-Nylon膜分别用2×、1×、0.2×、0.1×SSC和0.1% SDS漂洗，温度65℃。最后用Kodak X-Omat AR底片在-70℃曝光显影1～3 d。
结果
一、TCRβ基因重组的辨别［4］
用EcoRⅠ消化，11 kb和4 kb的带为胚系型带；用HindⅢ消化，8 kb、6 kb、3.5 kb的带为胚系型带，为非T细胞共有。不同于胚系型的带为重组带，见图1。
图1 经HindⅢ消化，箭头指处为重组带，余为胚系型带
二、TCRβ基因重组的检出率
病例组有38例(44.7%)TCRβ基因重组，对照组仅5例(7.8%)重组。经χ2检验，差异有高度显著性(χ2=20.69,P<0.01)。38例TCRβ基因重组阳性的患者中，33例有EcoRⅠ 5.0 kb和/或HindⅢ 5.5 kb重组带，其中8例有EcoRⅠ 21 kb，5例有EcoRⅠ 4.5 kb，6例有HindⅢ 18 kb重组带。5例无EcoRⅠ 5.0 kb,HindⅢ 5.5 kb的患者中，2例有EcoRⅠ 21 kb，3例有HindⅢ 18 kb重组带。
三、TCRβ基因重组与疾病的关系
(一) 横断面比较 TCRβ阳性组38例患者有22例(57.9%)HBeAg阳性，阴性组47例患者中22例(46.8%)HBeAg阳性，经χ2检验，差异无显著性(χ2=1.03, P>0.05)。阳性组的患者ALT均值(134±28)U/L高于阴性组(102±34)U/L，经t检验，差异有高度显著性(t=4.64,P<0.01)。
(二) 随访观察结果 首份血TCRβ基因重组阳性的8例患者的36例次检测中，TCRβ基因的重组出现在ALT高峰前或与高峰一致，并与HBeAg检出相吻合；当TCRβ基因重组消失时，HBeAg阴转，抗-HBe出现，ALT降低或恢复正常，见表1。首份血TCRβ基因重组阴性的11例患者的32例次检测中，仅6例次检测出TCRβ基因重组，与ALT与HBeAg关系不明显，且ALT波动小。
表1 8例TCRβ基因重组患者的随访观察
例号 项 目 随 访 例 次
1 2 3 4 5 6 7 8
例1 HBeAg + + - + + + + +
抗-HBe - - + - - - - -
ALT(U/L) 244 455 68 115 238 76 121 542
TCRβ + + - + + + + +
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 卡氏肺孢子虫肺炎肺表面活性蛋白A和D的变化
下一个医学论文： 丙型肝炎病毒非结构蛋白3人源单链抗体的筛选与鉴定
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 内科论文 >> 正文