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伤寒杆菌耐喹诺酮类机制分子生物学基础研究 |
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;C温育18 h后观察结果，以能抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
四、PCR扩增gyrA与parC
按参考文献［2］方法。1 ml过夜培养伤寒杆菌10 000×g，5 min收集沉淀，加入600 μl TE缓冲液(pH8.0)混悬，加入10%十二烷基硫酸钠(SDS) 30 μl， 37°C温育1 h后，用等量酚、酚氯仿、氯仿抽提后作模板DNA。50 μl反应混合物含10 mmol Tris HCl (pH 9.0)、50 mmol KCl、0.1% Triton X-100、1.5 mmol MgCl2、0.2 mmol dNTP、1U Taq酶、上下游引物各50 pmol、DNA模板2 μl。初始循环94°C、1.5 min,60°C、2 min,72°C、3 min；后续94°C、1 min,60°C、1 min,72°C、3 min，30循环；最后72°C延伸15 min。产物以2%琼脂糖电泳，0.5 μg/ml溴化乙锭染色，紫外光下观察结果。核酸分子量标准为pBR 322/Hinf Ⅰ片段。
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