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狼疮肾炎患者外周血单个核细胞内白细胞介素 |
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Higher than normal mRNA levels of IL-6,gp80 and gp130 were observed in the PBMCs from active LN patients.Moreover,a positive relationship among the levels of IL-6 mRNA,gp80 mRNA and gp130 mRNA in the PBMCs from active LN patients was found.However,the mRNA levels of IL-6,gp80 and gp130 were not correlated with the autoantibodies (ANA,anti-dsDNA and anti-Sm).Conclusion The IL-6-IL-6 receptor system in blood is up-regulated in active LN patients.Up-regulation of the gp80 and gp130 mRNA levels in vivo may be caused by endogeneously PBMC-derived IL-6.
【Key words】 Lupus nephritis; Leucocytes,mononuclear; Interleukin-6; gp80; gp130; Polymerase chain reaction,reverse transcription
白细胞介素-6(IL-6)可由外周血T、B淋巴细胞、单核细胞等单个核细胞产生，又可促进B淋巴细胞的终末分化及T淋巴细胞活化与增生［1］。已证实系统性红斑狼疮(SLE)患者B淋巴细胞可在体外自发性产生IL-6，在外源性重组IL-6作用下也能直接分化并合成IgG型抗ds-DNA自身抗体［2］，我们的研究亦证实外周血单个核细胞(PBMCs)在狼疮肾炎(LN)患者体内过度表达IL-6 mRNA与分泌过量的IL-6蛋白［3］。可见，在SLE发病机制中IL-6具有重要作用，但目前对于LN患者PBMCs IL-6受体成分gp80与gp130的mRNA表达情况的研究，国内外尚未见报道。本研究采用定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测34例LN患者PBMCs IL-6、gp80、gp130 mRNA水平，并分析它们之间及其与自身抗体的关系，从另一角度确定LN患者体内IL-6自/旁分泌机制的存在情况。
1 资料与方法
1.1 研究对象：选择符合1982年美国风湿病协会制定的SLE诊断标准且伴有肾炎表现、按SLEDAI判断为活动期LN患者18例，男1例，女17例，平均年龄(27±3)岁；非活动期LN患者16例，男1例，女15例，平均年龄(29±4)岁。采血前1个月均未服用免疫抑制剂，其中28例口服强的松(龙)0～20 mg/d，另6例口服强的松(龙)40～60 mg/d，但采血前均已停服24 h。另选体检正常者10名为对照组，男1名，女9名，平均年龄(28±5)岁。该三组人群年龄、性别基本匹配。
1.2 引物序列：根据文献［4］资料，委托中科院上海细胞生物研究所合成下列引物：IL-6：上游5′-ATGAACTCCTTCTCCACAAGCGC-3′，下游5′-GAAGAGCCCTCAGGCTGGACTG-3′；gp80：上游5′-CATTGCCATTGTTCTGAGGTTC-3′，下游5′-AGTAGTCTGTATTGCTGATGTC-3′；gp130：上游5′-ACAGATGAAGGTGGGAAGGAT-3′，下游5′-AGATGACATGCATGAAGACCC-3′；β-actin：上游5′-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3′，下游5′-GTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3′。
1.3 新鲜PBMCs制备：取清晨空腹静脉血5 ml，预先加入2% EDTA抗凝，采用Ficoll密度离心法制备PBMCs，以经0.1%焦碳酸二乙酯(EDPC)处理后的PBS洗涤3次后悬浮于PBS调制成细胞悬液1×106/ml，用于PBMCs总RNA的提取。
1.4 RNA的提取与纯化：采用异硫氰酸胍一步法提取和纯化PBMC上一页 [1] [2] [3] 下一页
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