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系统性红斑狼疮患者骨髓造血干 祖细胞体外培养及其发病机制的研究 |
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ier等提出的标准。其中男性3例，女性13例，年龄18～49.5岁，平均年龄33.5岁，16例处于活动期的SLE患者外周血象：红细胞(3.1～3.8)×1012/L，血红蛋白79～98 g/L，白细胞(3.0～4.0)×109/L，血小板(70～99)×109/L；3例经治疗后达缓解的SLE患者红细胞(3.5～4.2)×1012/L，血红蛋白110～120 g/L，白细胞(4.0～7.8)×109/L，血小板(100～300)×109/L。治疗方案：一经确诊，即用糖皮质激素和/或环磷酰胺(CTX)冲击治疗。
1.2 标本采集：所有病例均取髂前上棘或髂后上棘，抽出骨髓10 ml，用Ficoll液离心，，取出造血干/祖细胞，RPMI-1640洗3次，调整细胞数为2×106/ml。正常对照标本取自异基因骨髓移植供者的骨髓，RPMI-1640洗3次，调整细胞数如上。
1.3 造血干/祖细胞集落培养及鉴定：粒-巨噬细胞集落(GM-CFU)、红系集落(E-CFU)、巨核细胞集落(MK-CFU)的体外培养按常规的方法进行，GM-CFU培养体系，主要包括：终浓度为30%的胎牛血清(FCS)、10%的粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、0.9%的甲基纤维素、细胞浓度为2×105/ml，此外， 含少许谷胺酰胺、2-巯基乙醇、双抗(104 U/ml的青霉素和104 μg/ml的链霉素)。培养条件：37 ℃、5%CO2、100%湿度，培养7 d后计数，细胞数≥40个为一集落，3～39个为一丛落。GM-CFU的形态学观察及组织化学分析：用自制的毛细吸管吸出集落细胞于经粘胶处理过的载玻片上，干燥后甲醇固定30 min，瑞氏染色，油镜下可见集落由中性中幼粒细胞、中性杆状核细胞、中性分叶核细胞及少数单核细胞组成，过氧化酶(POX)染色98%的细胞呈阳性反应。E-CFU培养体系包括：30%的AB血浆、1%牛血清白蛋白(BSA)、5% PHA-LCM、1.5 U/ml EPO、0.9%甲基纤维素，细胞浓度及培养条件与GM-CFU相同，培养7 d计数，细胞数≥8个为一集落。E-CFU鉴定用3，3-二甲氧基联苯胺染色，细胞质呈棕黄色(提示细胞质含血红蛋白)。MK-CFU的培养体系主要包括30%的AB血浆、10% FCS、5% PHA-LCM、1 U/ml EPO、1.5 U/ml IL-11、0.9%甲基纤维素，细胞浓度及培养条件与GM-CFU相同，培养12 d计数，细胞数≥3个为一集落。取出集落后用PBS洗2次，离心涂片，瑞氏染色，可见巨核细胞细胞质呈透明状，细胞质有较高的折光性，用抗GPⅡb/Ⅲa单抗CD41免疫酶标检测呈阳性。
1.4 统计学处理：用±s表示，均数之间用t检验。
2 结果
2.1 SLE患者骨髓造血干/祖细胞体外集落(丛落)形成：GM-CFU集落数(182±50)，丛落数(231±92)，E-CFU集落数(56±27)，MK-CFU集落数(8±5)，三系集落(丛落)数与正常对照组差异有显著性，见表1。
表1 SLE患者造血干/祖细胞集落(丛落)数
与正常对照组集落数的比较
组别 例数 GM-CFU E-CFU MK-CFU
集落 丛落
对照组 12 256±80 106±42 89±32 40±16
SLE组 16 182±50 231±92 56±27 8±5
P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.05 ＜0.01
2.2 SLE患者在活动期与缓解期骨髓造血干/祖细胞体外集落(丛落)生成的比较：3例SLE患者在活动期的GM-CFU集落数为(167±40)，丛落数为(245±102)，E-CFU为(48±18)，MK-CFU为(6.2±2.4)，经治疗患者病情缓解后复查骨髓造血干/祖细胞集落(丛落)数，GM-CFU集落数为(230±90)(与活动期相比P＜0.01)，丛落数为(131±77)(与活动期相比P＜0.01)；E-CFU集落数为(81±33)(与活动期相比P＜0.05)，MK-CFU为(8&plusm上一页 [1] [2] [3] 下一页
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