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蛋白酪氨酸激酶在IL |
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孙铁铮 吕厚山 药立波
【摘 要】 目的 比较类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)与骨关节炎(osteoarthritis，OA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes，FLS)蛋白酪氨酸磷酸化状态的差异；探讨RA FLS中，蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase，PTK)在IL-1β和TNF-α作用下有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPKs)活化中的作用。方法 滑膜细胞原代培养，流式细胞仪鉴定滑膜细胞型别，提取蛋白进行SDS-PAGE单相电泳和ICE-PAGE双相电泳分离后，用Western blots 检测FLS蛋白磷酸化的状态。结果 滑膜细胞培养至第三代时，CD3、CD14、CD20、CD11b、von Willebrand factor阳性细胞比例小于1%；RA FLS蛋白酪氨酸磷酸化程度是OA FLS的4～6倍；IL-1β和TNF-α可以瞬时引起RA FLS蛋白酪氨酸磷酸化程度增加，并在短时间内激活MAPKs(ERK2，JNK2和p38为主)：genistein对ERK2活化抑制作用显著，而对于JNK2、p38，活化的抑制则较弱。结论 原代培养的滑膜细胞当传代至第三代时即可以获得型别均一的成纤维样滑膜细胞；RA FLS蛋白酪氨酸磷酸化状态较OA FLS明显增高；IL-1β和TNF-α可以瞬时引起RA FLS蛋白酪氨酸磷酸化程度增加，激活MAPKs通路(EPK2、JNK2、p38)，两种因子诱导MAPKs活化过程中PTK依赖途径和PTK非依赖途径并存。
【关键词】 关节炎； 滑膜； 成纤维细胞； 蛋白质酪氨酸激酶； 有丝分裂原活化蛋白激酶； 白细胞介素1； 肿瘤坏死因子
Role of protein tyrosine kinase in activation of MAPKs induced by IL-1β and TNF-α in fibroblast-like synoviocytes of rheumatoid arthritis
SUN Tiezheng,L Houshan,YAO Libo
（Arthritis Clinical and Research Center,People s Hospital,Beijing Medical University,Beijing 100044,China）
【Abstract】 Objective To evaluate the change of tyrosine phosphorylation status in rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes (RA FLS),compared with osteoarthritis (OA) FLS;and to explore the role of protein tyrosine kinase (PTK) in signaling of IL-1β and TNF-α,especially in activation of MAPKs in rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes (RA FLS) under the stimulation of IL-1β and TNF-α.Methods RA and OA FLS were primarily cultured; FLS type was defined by flow cytometry.After proteins were isolated from RA FLS and OA FLS,SDS-PAGE single-dimensional electrophoresis and ICE-PAGE two-dimensional electrophoresis were used to fractionate them,followed by Western blots to determine tyrosine phosphorylation status using specific anti-protein tyrosine phosphorylated antibodies.Results I[1] [2] [3] 下一页
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