，第5天尾静脉采血计数外周血白细胞数量，通过白细胞减少的程度确定小鼠是否受到免疫抑制。
1.2.4 实验动物的接种
小鼠通过吸入乙醚麻醉，使其昏迷超过1 min，抑制吞咽反射。取30 μl不同浓度或不同菌株的烟曲霉孢子悬液（孢子活力＞90%）滴入一侧鼻孔；阴性对照组小鼠进行同样麻醉，接种等量的含有0.05%吐温80的生理盐水；正常对照组小鼠不注射孢子悬液和生理盐水。
1.2.5 动物感染过程监测、脏器处理及感染菌株鉴定
感染后15 d内，每日观察小鼠的生存状态，测量体重，计算生存率；取感染死亡小鼠的肝脏、脾脏、肾脏和肺脏进行组织匀浆，稀释至浓度为1.0×10-3g/ml。取200 μl涂布在PDA平板培养基上，28℃培养3 d，进行菌落计数。将脏器剩余部分用10%（v/v）甲醛固定，浸入石蜡，切片，HE染色。15 d后，将仍然存活的小鼠颈椎脱臼法处死，处死小鼠的肝脏、脾脏、肾脏和肺脏的操作同前。将组织匀浆培养得到的菌株，利用小琼脂块培养法进行初步鉴定。提取菌株DNA，利用真菌通用引物(E1m4和rE2m4)扩增线粒体细胞色素b基因片段〔6〕，并进行DNA序列测定。将测定结果与GenBank中烟曲霉序列进行比对，以验证该菌株是否为烟曲霉。以上实验重复3次。
1.2.6 烟曲霉致病力的比较
通过综合分析生存率、中位生存期、平均体重、肺组织匀浆的菌落计数及其组织病理学变化来比较7株烟曲霉的致病力。
1.3 统计学处理 应用SPSS16.0软件对生存率进行Logrank检验，对Log (CFU/gram)进行方差分析。
2 结果
2.1 接种浓度的确定
接种烟曲霉JLC 50134 共7个浓度的孢子悬液，生存率计算结果见表1。发现浓度为1.0×107 CFU/ml时，在第3天50%的小鼠死亡，确定该浓度为实验接种浓度。表1 烟曲霉不同浓度孢子感染小鼠生存率(略)
2.2 小鼠的生存状态
注射环磷酰胺前，小鼠外周血白细胞计数为（7.2±0.23 ）×109 CFU/ml，注射环磷酰胺后第5天，小鼠外周血白细胞计数为（1.5±0.45 ）×109 CFU/ml，证实小鼠处于免疫抑制状态〔7〕。感染组小鼠接种孢子悬液2～3 d后，可见活动减少；7～8 d后表现为消瘦、体重急速下降，甚至死亡。阴性对照组小鼠接种等量生理盐水1～2 d内，活动减少，体重稍有下降，2 d后逐渐恢复正常，无死亡。正常对照组小鼠活动良好，体重上升。
2.3 小鼠生存率比较
JLC 50134感染小鼠的生存率较低，接种后第2天开始出现小鼠死亡，第3天时迅速下降至50%，第4天时生存率仅为10%，第5天时生存率为0。而JLC 30566感染小鼠在第5天时才出现死亡，第6天时生存率达50%，此后再无下降。JLC 31106感染小鼠第5天生存率为75%，至第7天时下降至37.5%，第10天后生存率降至25%。另4株烟曲霉感染小鼠的生存率变化与JLC 31106感染小鼠相似。JLC 50134感染小鼠的中位生存期为4，JLC 30566感染小鼠的中位生存期为6，其他5组均为5。Logrank检验结果为χ2=14.288，P<0.05。故可认为7组小鼠总体生存率的差别有统计学意义，说明JLC 50134感染小鼠生存率较低，JLC 30566感染小鼠生存率较高。见图1。
2.4 小鼠平均体重比较
7组小鼠感染后平均体重均开始下降，JLC 50134感染小鼠平均体重下降的幅度和速度最大，第3～4天1 d内小鼠平均体重下降约8.0 g，此后全部小鼠死亡。说明该菌感染造成的病理损害非常严重和迅速。JLC 30566感染小鼠的平均体重下降的幅度和速度最小，在第5～6天时下降约3.6 g，第7天后逐渐停止下降，随后稍有上升。说明该菌感染造成的病理损害相对较轻。其他5组的变化介于上述两者之间，下降幅度最大者1 d内约为4.9 g。阴性对照组仅在接种生理盐水后的5 d内平均体重下降，随后逐渐上升，在第9天后逐渐恢复至接种前水平，并不断上升。见图2。
2.5 小鼠的组织匀浆培养和菌落计数
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