,用Krebs溶液反复冲洗直到恢复基础张力,然后再次重复此过程。以高钾Krebs溶液诱导的第二次收缩反应值作为其他收缩反应标准。高钾Krebs溶液诱导的最大收缩值<10 mN的标本被舍弃。
1.5 血栓烷A2受体激动剂U46619诱导的收缩反应
U46619是一种血栓烷A2受体激动剂,为稳定的、非内皮依赖性的血管收缩剂。浓度反应曲线显示5.7×107mol/L 的U46619可以诱导最大收缩反应值的60%~90%。在高钾Krebs溶液诱导的第二次收缩达坪值后,用Krebs溶液反复冲洗,重新平衡后,用5.7×107mol/L 的U46619诱导血管环收缩。
1.6 血管非内皮依赖性舒张的测定
在器官浴槽中加入非内皮依赖性的血管舒张剂盐酸罂粟碱,检测血管对104mol/L的罂粟碱诱导的非内皮依赖性的舒张反应。
1.7 统计学处理
高钾Krebs溶液和U46619诱导的收缩反应值通过计算基础张力和最大稳定收缩值之间的差异而得。实验数据以x±s表示,采用SPSS11.0统计软件进行t检验。
2 结果
NHBD组与HBD组相比,由高钾Krebs溶液诱导的收缩反应值(mN)之间的差异(25.81±1.86 vs 26.80±1.59)无统计学意义(P>0.05);由U46619诱导的最大收缩反应值(mN)之间的差异(18.63±2.24 vs 20.23±2.09)无统计学意义(P>0.05);由U46619诱导的最大收缩反应平衡稳定后,向器官浴槽中加入罂粟碱使其浴槽内浓度达到10-4mmol/L,均能获得完全舒张,表明肺动脉血管平滑肌的舒张能力没有变化。
3 讨论
3.1 “无心跳供体”肺概念的提出
肺移植是挽救终末期肺部疾病患者的惟一有效途径〔6〕,但是供体的严重缺乏大大限制了其在临床上的应用。如果在循环停止后能从尸体上取得肺则不但可以缓解供体缺乏的问题,而且可以避免脑死亡对供体肺的损伤,于是,“无心跳供体”的提出成为了必然。 1991年Egan〔7〕实验证实经过1 h温缺血后狗的尸体肺仍可保持良好的气体交换功能,自2001年瑞典隆德大学医院Steen等〔8〕利用1例NHBD肺完成了肺移植的成功,对NHBD肺的研究日益受到重视〔9〕,本实验研究温缺血1 h对肺动脉平滑肌功能的影响,从而为NHBD的临床应用提供科学依据。
3.2 温缺血时间对“无心跳供体”肺的影响手术
1986年,Lechner及其同事〔10〕用从尸体中获得的肺上皮细胞进行培养,获得了成功。肺是惟一不依赖灌注进行细胞呼吸的实体器官,肺内细胞呼吸是通过气体相位差进行的;通过这一气体界面进行气体交换的主要过程是完全被动的〔11〕。因此,肺组织的代谢需求相对较低,肺实质细胞能耐受相当长一段时间的缺血。但是,肺在心跳停止后到底还能存活多久呢?不同的动物品种、不同的实验条件、不同的测定指标,使得各个实验室得出的温缺血时间限制不尽相同。一些研究认为温缺血1 h的肺仍可用作移植供体〔12,13〕,本实验将供体肺温缺血时间设计为1 h以适合目前的临床状况,观察临床工作中最可能遇到的条件下供体肺动脉的功能变化,以便为临床应用提供科学依据。
3.3 血管游离技术以及游离期间血管的保护
本实验采用“不触及血管”的游离技术,避免牵拉血管,不触及血管内膜,以防血管损伤。整个血管环制备期间,组织始终浸在4℃氧和的Krebs溶液中,这可以更好地保护血管〔4〕,减少实验误差。
3.4 关于实验模型
器官浴槽等长记录的实验模型已经被证明在血管平滑肌的功能评价方面非常可靠〔14〕。器官浴槽盛有37℃、持续氧合的Krebs溶液,为测定血管环提供一个正常的生理环境,并且为建立血管生理研究的体外模型提供了独特的可能性。
U46619是一种TXA2受体激动剂,本实验选其作为收缩剂有以下两个原因:首先,在预实验里,浓度反应曲线显示5.7×10-7mol/L的U46619诱导猪肺动脉发生了最大收缩反应(60%~90%);而且,无论肺动脉内皮存在与否,其诱导的收缩力相同,即其收
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