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温缺血1 h对猪离体肺动脉平滑肌功能的影响

【摘要】  目的 探讨温缺血1 h对“无心跳供体”肺动脉平滑肌功能的影响,为 “无心跳供体”肺的临床应用提供科学依据。方法 瑞典家猪16头,随机分为有心跳供体(heartbeating donor,HBD)组和无心跳供体(nonheartbeating donor,NHBD)组,分别获取内径约1.5 mm的肺动脉段,截至1.5 mm长的无分支的肺动脉环,用TissueOrganBath装置和高钾Krebs溶液、血栓烷A2(TXA2)类似物U46619和罂粟碱测定血管平滑肌的收缩和舒张功能。结果 NHBD组与HBD组相比,由高钾Krebs溶液诱导的收缩值(mN)差异(25.81±1.86,26.80±1.59)无统计学意义(P>0.05),U46619诱导的收缩值(mN)差异(18.63±2.24,20.23±2.09)无统计学意义(P>0.05),而且均能完全舒张。结论 温缺血1 h的NHBD肺动脉平滑肌舒缩功能保存完好。

【关键词】  猪;肺动脉;无心跳供体;肺移植;U46619

  1983年多伦多肺移植组首次报道了肺移植长期存活的成功经验〔1〕。随后许多国家的肺移植数量不断增加〔2〕。但是,由于供体的严重缺乏,越来越多的患者在等待供体的过程中死去〔3〕。本实验利用TissueOrganBath装置测定和比较有心跳供体(heartbeating donor,HBD)和无心跳供体(nonheartbeating donor,NHBD)肺动脉的收缩和舒张功能,探讨温缺血1 h肺用于肺移植的可行性,为NHBD肺的临床应用提供科学依据。

  1  材料与方法

  1.1  材料 

  7E型Grass多道生理记录仪、FTO3 D型张力传感器(美国Grass医疗器械公司);肌动描记仪Myograph(瑞典隆德大学医院医疗器械科定制);LEIKA WildM691型手术显微镜(瑞士Wild Leitz公司);Zeiss Stemi 1000型手术显微镜、目镜定标器(德国Zeiss公司);TM147T型双屏电子温度计(美国Electromedics公司);H18417型PH计(英国Hanna医疗器械公司);9102型PH电极(英国Thermo Orion Europe公司)。

  1.2  动物分组与标本制作 

  健康瑞典家猪16头,体重(25.9±1.6)kg。随机分为HBD组和NHBD组,每头猪取肺动脉血管环6段。HBD组:麻醉及全身肝素化(3 mg/kg),左侧开胸,诱导心室纤颤;以20 cm H2O的灌注压灌注4℃ LPD液(60 ml/kg);呼气末切取一小块周边肺组织,置入盛有4℃ Krebs液的培养皿中,在手术显微镜下采用不触及肺动脉的游离技术取出内径约1.5 mm的肺动脉段,用显微外科剪刀截成1.5 mm长的无分支血管环。NHBD组:诱导心室纤颤后,置于室温(约20℃)中1 h,再如上法灌注、取肺和制作标本。

  1.3  TissueOrganBath测定 

  将肺动脉环置入器官浴槽内行等长张力测定,37℃恒温的蒸馏水通过环绕浴槽的空腔持续循环,保持浴槽内37℃恒温。选用Krebs溶液作为器官浴槽内介质〔4〕,并持续充以95%氧气和5%二氧化碳的混合气以使溶液达到生理pH值(7.40)。
   
  将血管环置入浴槽液中温浴30 min后,在手术显微镜下将其挂于两个平行的L形金属挂钩上。一端挂钩连接张力传感器,并与7E型Grass Polygraph连接,持续测定血管等长张力,另一端与可移动微调装置相连,调节血管张力。将血管环在器官浴槽中平衡约2.5 h,期间每15 min更换浴槽中的Krebs溶液1次并反复牵拉血管将血管张力调节稳定至生理状态10 mN,称作基础张力。有研究表明直径1.5 mm猪肺动脉在10 mN的基础张力时可以达到最大的收缩反应〔5〕。血管张力经张力传感器放大以后,再由电子计算机数字化处理。

  1.4  血管收缩性的测定 

  2.5 h的平衡后,加入K+浓度为124 mmol/L Krebs溶液诱导平滑肌细胞的完全去极化,测定血管最大的收缩反应能力。预实验表明,为了达到血管的最大收缩反应需要重复收缩和舒张血管。所以,当诱导的收缩达坪值后

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