合PKC百分比无变化，而12周时细胞质、细胞膜及膜结合PKC百分比均显著增高，同时伴尿蛋白排泄率的显著增高。目前的问题是哪种PKC亚型在起主要作用，Ishii等在糖尿病肾组织中证实是PKCβ异构体增多，而且选择性阻断PKCβ可明显降低蛋白尿，高滤过及高TGF-β表达，因而大多数学者认为PKCβ亚型可能起主要作用。 但Henry等在转染GluT1的系膜细胞上证实PKCα转录增加达7倍之多，PKCα蛋白表达增加40%，激活型的PKCα增加63%[14]。事实上许多文献报道糖尿病大鼠肾脏的PKCα、β、δ、ε亚型的活性是增加的[15,16]。姚丽等发现STZ诱导的SD糖尿病大鼠成模后2周、4周、12周时肾小球PKCα的表达均呈显著上升且逐渐递增的趋势，相反PKCβI、βⅡ在糖尿病2周时都低于正常对照，4周、12周时才逐渐上升接近正常水平但并未超过正常对照水平[17]。张莉等发现STZ诱导的SD糖尿病大鼠5周末时肾皮质内PKCα mRNA水平增加1.67倍，胞膜相关的PKCα与总PKC的比值明显增高，细胞质的PKCα也高于正常，免疫组化显示糖尿病组近曲小管刷状缘的表达增强尤为突出，系膜区的表达也有一定增强，而正常组PKCα在近曲小管仅见少量表达(刷状缘侧)。研究采用肾小球与近曲小管的混合统计场计算阳性面密度、阳性单位及二者乘积，发现糖尿病组中的PKCα免疫组化染色的3项指标的均值明显高于正常对照。
本课题采用的是肾小球与肾小管分开统计的方法观察PKCα的阳性面密度、阳性单位及乘积，结果支持PKCα在糖尿病大鼠肾损害中活性明显增高的判断，尤其与张莉等学者的免疫组化结果相一致，提示PKCα在糖尿病肾损害中的重要作用。活化后的PKC主要通过6方面参与糖尿病肾损害的发生：(1)参与早期高滤过的形成。(2)参与肾小球毛细血管基膜增厚和ECM进行性积聚(活化raf1磷酸化激酶活化→激活有丝分裂原元件激酶MEK→活化有丝分裂原活化蛋白激酶MAPK→C-fos和C-jun表达↑→AP1样转录因子↑→TGFβ1转录↑)。(3)增加肾小球毛细血管通透性。(4)PKC活化后可促进一些生长因子的表达参与细胞增殖,如:VEGF、PDGF-B,STZ诱导的糖尿病大鼠5天就可见到肾组织内PDGF-B mRNA表达的明显增加;(5)PKC系统活化后可引起NF-κB与细胞质结合蛋白IKB的解离(通过IKB的磷酸化),使NF-κB活化。(6)参与肾脏局部RAS系统的激活。
3.3.2 药物干预治疗对3种蛋白分子免疫组织化学染色结果的影响及可能机制的讨论 近年来AT1受体拮抗剂、他汀类药物的研究文献颇多，但氯沙坦、辛伐他汀对糖尿病肾脏PKCα、 NF-κB及PDGF-B表达影响的报道不多。尤其是两药联合治疗的免疫组化定量分析报道更为鲜见。
(1)氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏PKCα、 NF-κB及PDGF-B表达的作用。氯沙坦(losartan)的作用机制是明显扩张肾小球出、入球动脉，增加肾血流量，降低肾内压，并阻断因AT1受体后过度活化引起的病理生理过程。郑晓静的观察表明，氯沙坦15mg/(kg?d)灌胃的糖尿病SD鼠其肾小球内NF-κB免疫组化的阳性细胞数、黏附分子-1(ICAM-1)的表达及单核细胞数均明显低于糖尿病对照组但未达到正常组水平。
本研究氯沙坦治疗组PKCα表达的显著下降可能是通过抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体1活化后引起的G蛋白或酪氨酸蛋白激酶耦联的磷脂酶C(PLC)/PLD激活所产生的二酰甘油(DAG)的增多而达到抑制PKCα进一步活化的效果。而NF-κB、PDGF-B的下降继发于局部RAS的阻断及PKCα活性的下降。
(2)他汀类药物对糖尿病大鼠肾脏PKCα、 NF-κB及PDGF-B三指标表达的作用。他汀类药物在糖尿病肾病中的机制是基于其抗细胞增殖作用。由于血胆固醇浓度与肾功能减退呈正相关[18]，他汀类药可通过调脂作用改善肾损害的进程，然而该类药对本身无明显高脂血症的残余肾模型同样可延缓肾小球硬化的进展[19], 表1的结果支持降脂以外的肾保护作用。早在10年前就发现辛伐他汀可抑制PDGF引起的人肾小球系膜细胞DNA合成和细胞增殖，且呈剂量依赖性[20]。李航等学者的观察表明，肾小球系膜细胞在脂多糖(LPS)诱导下的NF-κB的活化及其他炎性细胞因子mRNA的高表达可被洛伐他汀明显抑制，而加入甲羟戊酸及法呢醇则可解除抑制，说明洛伐他汀通过抑制NF-κB活化途径达到抑制炎性细胞因子表达的作用[21]。陈丽萌等学者则观察了洛伐他汀对高糖作用下的人肾小管上皮细胞NF-κB的作用，发现洛伐他汀可部分或全部逆转高糖对肾小管上皮细胞NF-κB的活化并抑制高糖对肾小管上皮培
上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] 下一页
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 内科论文 >> 正文