GFD剂量的升高，鸡胚尿囊膜毛细血管的数量也随着增加(F=3.34,P<0.0425)，当GSTVEGFD达到20 μg时，尿囊膜血管可形成立体的致密的网状结构，而对照组没有明显的变化(图8)。
2.讨 论
VEGFD基因编码53 kD的前体形式的VEGFD，经过细胞内或细胞外蛋白酶的加工，去掉N末端和C末端的多肽成为只含VEGF同源区(VHD)片段的成熟形式的VEGFD。与未经加工的VEGFD相比，经过加工的VEGFD结合VEGFR2和VEGFR3的能力分别提高了290倍和40倍，因此具有最高的结合活性[6]。本研究从人胎肺中直接克隆VEGFD的VHD片段，构建重组表达载体并在大肠杆菌中成功表达融合蛋白GSTVEGFD。ELISA和MTT实验表明，融合蛋白GSTVEGFD能与重组人VEGFR3结合，刺激HEL细胞生长，说明本实验所表达的成熟形式的VEGFD蛋白具有生物学活性，与报道相一致[7]。报道中成熟的VEGFD的分子量为21 kD的非共价结合的二聚体，而本实验中目的蛋白的分子量为12 kD的单体也具有相应的活性。
鸡胚尿囊膜是鸡胚外的一层膜，主要功能是提供进行气体交换的表面，同时鸡胚尿囊膜功能的行使也依赖于致密的血管网的支撑。正是由于鸡胚发育过程中大量尿囊膜血管的形成，为研究血管发生和形成提供了很好的模型[7]。
VEGFD与VEGFR3结合促进胚胎期淋巴管增生和形成，而且在肿瘤淋巴转移过程中发挥了重要作用。VEGFD还可以与VEGFR2作用，刺激血管的形成。在本实验中，成熟形式的VEGFD能够促进尿囊膜血管的形成，使之形成毛细血管网，这里VEGFD与VEGFR2的结合可能发挥了主要作用。因为未经过加工的VEGFD前肽只与VEGFR3结合，而成熟形式的VEGFD与VEGFR2和VEGFR3的结合能力都升高，但与VEGFR2的亲和能力的提高是与VEGFR3能力提高的7倍，而VEGFR2主要介导血管的形成[6]，因此有理由认为鸡胚尿囊膜血管的大量形成归功VEGFD与VEGFR2的结合而介导的信号通路。
总之，本研究利用大肠杆菌系统成功表达重组GSTVEGFD融合蛋白，GSTVEGFD不仅具有与VEGFR3/Fc结合的活性，还能刺激HEL细胞生长，并促进鸡胚尿囊膜血管生成，为进一步探讨VEGFD的作用机理，阐明VEGFD/VEGFR3信号通路的作用奠定了基础。
【参考文献】
1Staker SA, Achen MG, Jusila L, et al. Lymphangiogenesis and cancer metastasis. Nature Reviews Cancer, 2002; 2: 573-583
2Risau W. Mechanisms of angiogenesis. Nature, 1997; 386: 671-674
3Skobe M, Hawighorst T, Jackson DG, et al. Induction of tumor lymphangiogenesis by VEGFC promotes breast cancer metastasis. Nat Med, 2001; 7: 192-197
4 Stacker SA, Caesar C, Baldwin ME, et al. VEGFD promotes the metastatic spread of tumor cells via the lymphatics. Nat Med, 2001; 7(2): 186-190
5Yulong H, Karpanen T, Alitalo K. Role of lyphangiogenic factors in tumor metastasis. Biochimica et Biophysica Acta, 2004; 1654: 3-12
6Stacker SA, Stenvers K, Caesar C, et al. Biosynthesis of vascular endothelial growth factorD involves proteolytic processing which generates noncovalent homodimers. J Biol Chem, 1999; 274: 32127-32136
7Scavelli
上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 内科论文 >> 正文