。而作为阴性对照的pComb3噬菌体空载体悬液则未显色。表明初级抗体库中噬菌体上有Fab段的表达，见图4。
3 讨论
在构建噬菌体抗体库时，首先必须克隆出B细胞的全套可变区基因。实验表明，杂交瘤细胞、脾细胞、淋巴结细胞、外周血淋巴细胞、甚至体外免疫的细胞都可以作为建库的来源。根据有些学者研究提示，在这些细胞中，以选用淋巴结细胞建库为更好〔3〕，因为这种细胞有利于筛选到亲和力高和特异性的抗体。本研究所建的抗体库是从经病理证实的大肠癌患者转移淋巴结构建的，因未经人工免疫，所以属于天然抗体库。尽管如此，但人具有的巨大的V基因库仍然是经过繁殖剔除的，这些B细胞一直接触许多不同种类的抗原，尤其是接触肿瘤抗原，在肿瘤抗原的压力选择下已发生基因重排，因此，此类抗体库的库容会小于天然抗体库，但从此类抗体库中却容易筛选到高亲和力的特异性肿瘤抗体。在丧失了一定的多样性的同时，获得了较高的特异性和亲和性。
噬菌体抗体库技术使用的载体都是在已有的噬菌粒基础上进行改建的,噬菌粒作为载体的优点是转化率高。但是,此类载体需要有辅助噬菌体来产生单链基因并组装成有感染力的噬菌粒。为了更有效地合成表达抗体库,各国学者在载体构建方面作了一些探索〔4，5〕。本研究中所采用的pComb3是一个建库所需的常用载体，使用这些载体构建抗体基因库时,获得的全套重链抗体基因与轻链基因以适当的内切酶消化后,克隆进载体相应酶切位点。目前国内外学者在建库时通常使用该噬菌体载体，因为本实验策略是建立和验证设计的双盲法筛选大肠癌特异性抗原和抗体的方法，建库的目的是为了获得用于进一步筛选的噬菌体试剂，筛选和鉴定有价值的大肠癌抗原和抗体将是以后进一步深入的工作，因此未选用特殊改良的方法、复杂且经费较高的载体。
如前所述，本研究建立的抗体库已在体内被肿瘤细胞抗原免疫过，所以近似免疫抗体库，虽然此库容量不算太大，库容量为1.4×106，但许多实验室已从此种抗体库中比较容易的筛选出高亲和力的抗体。而该抗体库用没有免疫机体的其他抗原筛选时，其抗体的亲和力降低十倍。用HIV阳性病人淋巴细胞构建的一个抗体库，当用于筛选抗MHCⅡ、抗dsDNA、CD14、EGF受体和抗GD2的抗体时，其亲和力只有10-3 mol/L，而用同一个库筛选抗gp120的抗体时的亲和力达10-8 mol/L〔6〕。这些结果表明，经免疫过的淋巴细胞所构建的抗体库对于筛选特定抗原的片段抗体是非常合适的。
【参考文献】
1 吴保平，肖 冰，万田谟，等.结肠癌患者淋巴结构建抗结肠癌噬菌体Fab抗体库〔J〕.中华消化杂志，2002；1（22）：158.
2 Pimenidou A, Madden LA, Topping KP, et al.Novel CD43 specific phage antibodies react with early stage colorectal tumours〔J〕.Oncol Rep,2004;11(2):32731.
3 Grabert RC, Cousens LP, Smith JA, et al. Human T cells armed with Her2/neu bispecific antibodies divide, are cytotoxic, and secrete cytokines with repeated stimulation〔J〕. Clin Cancer Res, 2006;12(2):56976.
4 Den W, Sompuram SR, Sarantopoulos S, et al. A bidirectional phage display vector for the selection and mass transfer of polyclonal antibody libraries〔J〕. J Immunol Methods, 1999;22（2）:4557.
5 Son JH, Lee UH, Lee JJ, et al. Humanization of agonistic antihuman 41BB monoclonal antibody using a phagedisplayed combinato
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