少部分神经元蓝染，细胞死亡率为15.00%±2.50%、22.17%±1.04%；90、120 min使神经元出现皱缩，胞浆空泡明显，突起缩短、断裂，胞浆空泡明显，蓝染细胞增多，细胞死亡率为40.67%±2.08%、56.00%±2.17%；180 min使神经元轮廓模糊，全部蓝染，细胞死亡率为97.17%±1.89%。
2.4 LDH漏出率检测
随OGD时间增加，神经元LDH漏出率逐渐增加，其中神经元OGD 45 min时LDH漏出率开始明显增加（P<0.05）。见图2。
3 讨论
体外细胞培养已被广泛应用于神经细胞分子生物学研究。本研究采用酶消化法和机械分离法相结合成功进行体外神经元原代培养并通过NSE免疫细胞化学染色进行鉴定。NSE是一种酸性可溶性蛋白质，是神经细胞分化程度特异性标志物，应用NSE特异性抗体经免疫细胞化学染色，光镜下可见神经元胞浆被染成棕黄色，形态为椭圆形、三角形、突起相互交织成网状，随机选取细胞计数后，NSE阳性细胞百分率>85%。提示本实验培养出高纯度及发育成熟的神经元。
缺血缺氧性脑损伤模型报道较多〔4,5〕，方法及实际操作不尽相同，但体内实验模型难免受到体液、循环等复杂因素的影响，很难解释某单一因素的影响作用及强度。本实验利用自行设计、长春应用化学研究所生产的组装瓶和负压吸引装置将DHank平衡盐溶液处理成缺氧的细胞培养液，液体的氧浓度<1%，将真空干燥器制成缺氧罐，罐内O2含量<1%，CO2浓度为5%，台盼蓝染色显示OGD 30 min内，神经元未见明显损伤，90 min时神经元出现皱缩，细胞死亡增多，随OGD时间增加，神经元LDH漏出率逐渐增加，其中OGD 0和15 min神经元LDH漏出率无显著差异，OGD 60 min时明显增加。
本文表明OGD方法可明显造成神经元损伤，能成功模拟体内脑缺血过程，为研究神经细胞缺血损伤机制的进一步研究可提供有效、简单、实用、可靠的方法和手段。
【参考文献】
1 Kerendi F，Halkos ME，Kin H，et al.Upregulation of hypoxia inducible factor is associated with attenuation of neuronal injury in neonatal piglets undergoing deep hypothermic circulatory arrest〔J〕.Thorac Cardiovasc Surg，2005;130(4):1079.
2 Yin W，Signore AP，Iwai M，et al.Rapidly increased neuronal mitochondrial biogenesis after hypoxicischemic brain injury〔J〕.Stroke， 2008；39(11):305763.
3 Cai J，Kang Z，Liu WW，et al.Hydrogen therapy reduces apoptosis in neonatal hypoxiaischemia rat model〔J〕.Neurosci Lett，2008;441(2):16772.
4 Romera C，Hurtado O，Botella SH，et al.In vitro ischemic tolerance involves upregulation of glutamate transport partly mediated by the TACE/ADAM17tumor necrosis factoralphapathway〔J〕.Neuroscience，2004；24:13507.
5 Jiang W，Gu W，Hossmann KA，et al.Establishing a photothrombotic ring stroke model in adult mice with late spontaneous reperfusion:quantitative measurements of cerebral
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