C/CMV、LLC/cMOAT细胞株，为猪近端肾小管上皮细胞LLCPK1分别转染空的载体和人的MRP2 cDNA建立的一组细胞株。Western blot实验显示，LLC/CMV细胞中无MRP2表达，LLC/cMOAT细胞高表达人MRP2蛋白并对多种抗肿瘤药物表现有不同程度的耐药[9]。本研究结果显示LLC/cMOAT细胞对CPT11、ADM、DDP、VCR有不同程度的耐药性，对VP16、TAX无明显耐药，与研究报道相似[10]。MRP2与多种化疗药物的耐药有关，逆转MRP2相关的耐药可能有助于提高化疗的效果。有研究表明[10]CsA能完全逆转LLC/cMOAT的多药耐药，但由于CSA存在明显的肾毒性及免疫抑制作用而使其临床应用受到限制。目前尚没有能在临床应用的安全有效的逆转药物，因此开发安全有效的逆转剂具有重要的意义。
鞣酸又名单宁酸，是一类比较复杂的多元酚类化合物，广泛存在于植物界，在许多平常的食物如坚果、豆类、葡萄中均发现含有鞣酸;约70%以上的中草药含有鞣质类化合物，如五倍子、地榆、肉桂、大黄、仙鹤草等。它具有多种生物活性，过去应用的多为其收敛性、抗氧化性、抗病毒等，近年来国外研究发现鞣酸具有一定的抗肿瘤活性，能抑制多种肿瘤细胞如胆管癌的生长[11]，抑制肿瘤蛋白酶体活性[12]，进一步诱导肿瘤细胞凋亡[11]。
图2 TA聚合VCR对LLC/cMOAT细胞凋亡的影响
本实验显示鞣酸在2.5～10.0μmol/L浓度范围内对LLC/CMV 和LLC/cMOAT细胞均无明显细胞毒性，且能逆转LLC/cMOAT细胞的多药耐药，对LLC/CMV细胞无明显增敏作用。MRP2是依赖于ATP的药物外排泵，主要通过改变细胞内的药物分布和将药物转移至细胞外，降低细胞内的药物浓度而导致耐药[13]。DNR是亲脂类抗癌药物，在流式细胞仪的激光照射下发红色荧光，荧光强度与浓度相关，检测荧光强度可以反映出细胞内DNR浓度，了解细胞的耐药程度及逆转后的效果。本研究结果显示，与LLC/CMV细胞比较，LLC/cMOAT细胞内DNR积聚能力明显降低。当LLC/cMOAT细胞经鞣酸处理后细胞内DNR浓度明显提高，且呈浓度依赖性，表明TA能增加LLC/cMOAT对DNR的聚集能力。TA可能是通过抑制MRP2的药物外排功能，从而一定程度上恢复化疗药物的敏感性，逆转了细胞的多药耐药。
细胞凋亡是大多数抗肿瘤药物抗肿瘤作用的机制之一。有学者认为具有MDR特性的细胞常显现出凋亡抗性，凋亡抗性可能是MDR的本质之一[14]，肿瘤的发生与细胞凋亡机制减弱有关，诱导肿瘤细胞凋亡可以逆转肿瘤的MDR，提高肿瘤的化疗疗效。本实验结果显示TA能阻断LLC/cMOAT细胞周期，使其停滞于G1期，使G1期细胞数增多，细胞生长受到了抑制，与Kamei H [15] 研究一致;此外，细胞凋亡率随作用浓度的增高而增高，表明TA能诱导LLC/CMV细胞凋亡，呈时间浓度依赖性。
本实验研究表明，TA对LLC/cMOAT细胞有明显的耐药逆转作用，其机制涉及抑制药物外排而影响细胞内药物的积聚、细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡等方面。TA对MRP2蛋白过表达的耐药细胞LLC/cMOAT作用的分子水平的机制以及体内抑癌效果如何有待深入研究。
【参考文献】
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[2] Lacueva J,Perez Ramos M,Soto JL,et al.Multidrug resistanceassociated protein (MRP1) gene is strongly expressed in gastric carcinomas.Analysis by immunohistochemistry and realtime quantitative RTPCR[J].Histopatholo，2005,46(4):389395.
[3] Naus PJ,Henson R,Bleeker G,et al.Tannic acid synergizes the cytotoxicity of chenmtherapeutic drugs in human c
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