ADM 1.142±0.215 3.446±0.2733.02*DDP 2.203±0.412 8.841±0.8674.01*VCR 0.035±0.004 0.326±0.0219.31*
*P<0.05与对照细胞LLC/CMV相比。2.2 TA对LLC/CMV和LLC/cMOAT细胞增殖的影响
TA在2.5～10.0μmol/L浓度范围内，对LLC/CMV和LLC/cMOAT细胞无明显细胞毒作用，其IR均<10%，见表2。表2 TA对LLC/CMV和LLC/cMOAT细胞生长
的抑制作用(IR，%，±s，n=6)
TA(μmol/L)LLC/CMVLLC/cMOAT 2.52.06±0.361.87±0.35 5.04.87±0.584.32±0.5010.09.21±0.678.79±0.68
2.3 TA对LLC/cMOAT细胞MDR的逆转作用
TA在2.5～10.0μmol/L浓度范围内无明显细胞毒性作用，但与VCR联合用药时，可使VCR对MDR细胞的IC50下降，且呈剂量非线性依赖性，逆转倍数见表3。TA对敏感株敏感细胞无明显增敏作用。表3 TA对LLC/CMV和LLC/cMOAT细胞VCR 耐药性的逆转(±s,n=6)
TA
(μmol/L)IC50 (μmol/L)逆转倍数LLC/CMVLLC/cMOATLLC/CMVLLC/cMOAT 0 0.033±0.008 0.322±0.019 —— 2.50.031±0.006*0.064±0.007Δ 1.135.09 5.00.029±0.005*0.051±0.005Δ 1.216.3310.00.028±0.007*0.042±0.004Δ 1.257.76
*P>0.05与对照组LLC/CMV比较;ΔP<0.01与对照组LLC/cMOAT比较2.4 TA对LLC/cMOAT细胞内DNR荧光强度的影响
如图1所示LLC/cMOAT细胞内DNR积聚能力较LLC/CMV细胞明显降低，P<0.05。然而，经TA处理后，能明显增加LLC/cMOAT细胞内DNR浓度，P<0.05，且随着TA浓度的提高，其细胞内荧光强度亦逐渐增强，表明TA能增加细胞内DNR药物浓度，且呈浓度依赖性。
2.5 TA对LLC/cMOAT细胞周期的影响
5.0μmol/L TA作用4、8、12h后，发现未有明显的亚二倍体(PreG1)出现;而0、4、8、12h的G1期细胞数增多(%)如表4，说明在未出现明显凋亡之前G1期细胞数呈时间依赖性增多，结果显示TA能阻滞细胞于G0/G1期，S期比例减少，细胞增殖指数明显下降，与对照组比较，各组差异有统计学意义(P<0.05)。
2.6 TA诱导LLC/cMOAT细胞的凋亡
PI染色流式细胞记数显示，2.5μmol/LTA与表4 TA对LLC/cMOAT细胞周期的影响与0hG0/G1比较，P<0.05VCR联用，0、24和48h细胞凋亡率分别为1.65%、12.1%和19.0%，表明TA诱导细胞凋亡呈时间依赖性。0、2.5μmol/L、5.0μmol/L和10.0μmol/LTA与VCR共同处理细胞24h后，其凋亡率分别为4.96%、11.2%、17.9%和25.1%,而对照组细胞24h自然凋亡率为1.98%，显示TA诱导细胞凋亡亦呈浓度依赖性。
3 讨论
MRP2又名cMOAT (the canalicular multispecific organic anion transporter)，是肝细胞膜上一种重要的转运蛋白，其基因编码位于人类10号染色体短臂24带，蛋白相对分子质量为190000，属于ATP结合的盒式蛋白。MRP2在许多正常组织如肝脏、肾脏近曲小管、十二指肠、空肠、胆囊等都有表达;MRP2通过水解ATP酶参与细胞内外物质的转运。其底物主要为一些有机阴离子，包括胆红素和各种谷胱甘肽、葡萄糖醛酸、巯基的结合物等，具有重要的生理功能。Sandusky GE[5]研究发现MRP2在许多肿瘤组织中如肾细胞癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌等均有表达;MRP2在结肠癌和卵巢癌[68]组织中高表达的同时，在化疗过程中对顺铂的耐药性明显增强。近年来的研究发现MRP2表达特征与恶性肿瘤化疗效果具有密切的关系，阳性或高表达者化疗效果不佳，甚至无效，而阴性或低表达者化疗效果较好。
本实验中使用的LL
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