um SOD was inreased obviously in SJG group (P<0.05). Highly positive correlation between collagen area and level of serum MDA was observed (r=0.435, P<0.05), and significantly negative correlation between collagen area and level of serum SOD was found (r=-0.358, P<0.05). Conclusion SJG has good antifibrosis effects in rats with hepatic fibrosis, and its mechanism may be correlated with its antilipid peroxidation.
KEY WORDS: hepatic fibrosis; Sanjia Yigan Granule; hepatic stellate cell; lipid peroxidation
脂质过氧化(lipid peroxidation)在肝纤维化过程中发挥重要作用,脂质过氧化的终产物丙二醛(malondialdehyde, MDA)可以激活静息状态的肝星型细胞(hepatic stellate cells, HSCs),促使其合成与分泌大量的细胞外基质(extracellular matrix, ECM)而最终导致肝纤维化的形成[1]。因此,可通过抗脂质过氧化来达到抗肝纤维化的目的[2]。我院自制复方中药三甲益肝冲剂(Sanjiayigan Granule, SJG)具有活血化瘀、健脾益气、舒肝理气、软坚散结等作用,对治疗肝炎后肝硬化和慢性肝炎已取得良好效果[3]。本研究以二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine, DMN)诱导大鼠肝纤维化,以复方丹参(compound Salviae miltiorrhizae, Sm)作为治疗对照组,观察三甲益肝冲剂对大鼠肝纤维化的作用,并进一步探讨其与抗脂质过氧化的关系,以指导临床用药。
1 材料与方法
1.1 材料
雄性SpragneDawley(SD)大鼠,3月龄,40只,体重180-220g(新乡医学院实验动物中心提供);DMN(日本化成公司);三甲益肝冲剂(12g/袋,新乡医学院第一附属医院生产,产品批号071024,组方包括穿山甲、莪术、桃仁、丹参、郁金、赤芍、黄芪、白术、柴胡、内金、大黄等十五味。以蒸馏水稀释成0.34g/mL溶液);复方丹参滴丸(天津天力士制药股份有限公司生产,产品批号20070417,研细以蒸馏水稀释成8.1g/L溶液)。超氧化物岐化酶(SOD)、MDA检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
1.2 动物分组及肝纤维化模型的建立
SD大鼠饲养笼饲养,自由饮水,标准饲料喂养。适应环境1周后,随机分4组:正常组、模型组、复方丹参组和三甲益肝冲剂组(n=10)。参考文献[4]方法造模,将DMN 335μL加0.15mol/L的氯化钠溶液中稀释至66.96mL,制备腹腔注射液,每周连续3d,按1次/d腹腔注射上述DMN稀释液2mL/kg(第1周为此剂量的2/3),共4周。模型对照组造模同时予生理盐水灌胃,复方丹参组造模同时给予复方丹参滴丸蒸馏水稀释液灌胃(每日10mL/kg),三甲益肝冲剂组造模同时给予三甲益肝冲剂蒸馏水稀释液灌胃(每日10mL/kg),正常对照组腹腔注射生理盐水,用自来水灌胃,方法剂量同上,共4周。在造模过程中模型组死亡1只。
1.3 标本留取
实验4周后,氯氨酮麻醉下,将动物取仰位固定于手术台上,取左侧第3-4肋间逐层切开暴露胸腔,寻找下腔静脉,并抽血约4mL,离心获取血清待检;处死动物后,立即打开腹腔取肝组织,切成0.5cm×0.5cm×0.5cm大小的肝组织块,置于100mL/L中性福尔马林固定待用。
1.4 血清SOD活性和MDA含量的测定
将采集的血清,分别按试剂盒说明书进行。
1.5 肝组织病理观察
常规制作HE 切片及Masson染色,利用病理图像分析仪,定量分析Masson染色胶原,首先设定窗口面积,每组至少选8个视野,测定窗口范围内的胶原面积。
1.6 统计学处理
应用SPSS 12.0统计软件,计量资
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