ion with Chlamydia trachomatis in the airway.
【KEY WORDS】 Chlamydia Trachomatis,IL17,Respiratory Tract Infections,Mice
沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)是一类严格细胞内寄生的病原体，能引起多种人类和动物疾病，包括沙眼、生殖道感染、不孕不育和肺炎等,对人类的危害性很大。小鼠模型研究表明，CD4+Th细胞(Th1而非Th2)和依赖IFNγ的免疫反应是宿主控制衣原体感染的主要保护性因素[1]，抗体和CD8T细胞也可能在宿主抵御衣原体感染中发挥作用[2]。然而，Th17细胞和其分泌的细胞因子IL17在沙眼衣原体感染中的作用尚不清楚。
初始CD4+T细胞可被诱导从而表达转录因子RORγt，并分泌细胞因子IL17，分化成为除了Th1细胞和Th2细胞之外的一种新的Th细胞亚型Th17[3]。IL17家族包括IL17(IL17A),IL17BF。IL17和IL17F主要由活化的CD4+T细胞产生，参与宿主固有免疫应答如中性粒细胞募集及活化[4]。IL17可在不同的组织诱导前炎症反应或抗炎症反应，诱导IL6、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)、白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor)和细胞间黏附因子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM 1)的产生[5,6]，另一方面，IL17 也能阻止肿瘤坏死因子(TNFa)诱导的趋化因子RANTES和干扰素诱导蛋白10(IP10)的分泌[7,8]。IL17做为前炎症因子在许多疾病中发挥作用,例如，用抗IL17单克隆抗体处理的小鼠能抑制中枢神经系统的自身免疫性疾病[9]。缺乏产生Th17细胞的小鼠能抵抗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)、胶原蛋白诱导的关节炎和炎症性肠病(IBD)[9,10]。本研究以鼠衣原体肺炎为模型，研究衣原体感染不同时间IL17的表达，发现IL17在感染衣原体后在固有性免疫应答早期阶段短暂表达，随后很快下降，但其他细胞因子IL6,IL8,TNFα,IL1α,IL1β则分别在第3天或第8天出现高峰，基于这些资料我们认为IL17在衣原体肺炎早期出现，能提高局部IL6,IL8,TNFα,IL1α,IL1β的表达，从而提高机体抗感染固有免疫应答能力。
1 材料与方法
1.1 实验材料 主要试剂:IL17试剂盒与其他细胞因子的试剂盒均购自R&D systems 公司,组织匀浆器购自Fisher Scientific公司，Hoechst染料购自Invitrogen。Cy2标记羊抗兔IgG(绿)和Cy3标记羊抗鼠(红)购自Jackson免疫制剂公司(PA,USA)。
主要仪器:CO2培养箱(Formo,USA);荧光生物显微镜(AX270 equipped with a CCD camera,Olympus,Japan);酶标仪(Molecular Devices Corporation,USA)。
1.2 沙眼衣原体株 沙眼衣原体小鼠肺炎株(MoPn,由Dr.ZHONG实验室提供)生长于HeLa 229细胞,用不连续密度梯度离心法纯化衣原体原体(EB),进行活性测定后用于感染小鼠，具体方法参见文献[11]。
1.3 实验动物及感染 8～9周龄雄性或雌性C57BL/6小鼠,体重18～20g，均购自Jackson laboratories,Bar Harbor,Maine。随机分组,每组6～8只，依不同处死时间点，分为8个研究组及相应的8个对照组。标记动物,分笼颗粒饲料饲养,温度18～24℃,光暗周期12h。自由饮水进食。研究组在微麻状态下鼻腔内吸入40μL含4×103MoPn包涵体形成单位(IFU)的SPG(蔗糖磷酸盐缓冲液),对照组吸入等量SPG。在感染后不同时间处死研究组小鼠及相应对照组小鼠。
1.4 肺组织匀浆制备 无菌采集小鼠全肺,在冰上用2mL玻璃研磨器加入1.5mL SPG制备成组织匀浆，经超声后，在4℃，6000rpm/min离心15min,上清液用来进行IFU计数和细胞因子的测定。
1.5 衣原体活性测定 选取消毒灭菌后盖玻片放入24孔培养板内,收获培养24h左右的Hela细胞，经胰蛋白酶消化、记数后，用含10%FBS的DMEM稀释至8×104/mL,每孔加1mL,37℃及5%CO2条件下培养过夜。将生长在盖玻片上的
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