significant association between Helicobacter pylori genotypes vacA and cagA and special gastric diseases. The vacA and cagA genotypes cannot be used for predicting clinical outcomes caused by Helicobacter pylori infection.
[KEY WORDS] stomach diseases; Helicobacter pylori; gastric mucosa; vacA gene; cagA gene; polymerase chain reaction
自1983 年WARREN与MASHALL从胃黏膜中分离出幽门螺杆菌(Hp)后，国内外学者对Hp感染与胃十二指肠疾病的关系从多方面做了大量的研究。Hp感染是慢性胃炎和消化性溃疡的病因之一，也是胃癌的危险因素[1]。Hp的空泡形成毒素(vacA)基因和细胞毒素相关(cagA)基因及其表达产物与Hp感染者的临床发病有着密切关系[2]。本研究采用聚合酶链反应(PCR)技术检测105例胃疾病病人Hp vacA、cagA基因亚型，以探讨Hp vacA、cagA基因亚型与胃疾病的关系。
1 对象和方法
1.1 研究对象
选择2008年6—12月在我科就诊，需胃镜检查的病人105例，包括慢性浅表性胃炎(CSG)45例，慢性萎缩性胃炎(CAG)48例，胃癌(GC)12例。其中男51例，女54例，年龄17～76岁。胃镜检查前1个月内没有服用过抗生素、质子泵抑制剂、H2受体拮抗剂、非甾体类消炎药等。于胃窦处取黏膜3块，1块进行快速尿素酶反应，1块送组织学病理检查(亚甲蓝染色)，1块进行 PCR检测。
1.2 模板制备
用 BioTeke DAN 提取试剂盒(北京)提取胃黏膜及可能 Hp基因组，严格按照试剂盒说明书操作，
2期张凤娟，江月萍，赵清喜. 幽门螺杆菌vacA及cagA基因型与胃疾病的关系99
避免样本之间交叉污染。基因组 DNA置-20 ℃保存备用。
1.3 PCR反应
扩增 Hp vacA、cagA基因亚型的引物序列同文献[35]，见表1。采用广州东盛生物有限公司提供的 2×PCR Taq Mix反应体系，总反应体积为为50 μL。用touchdown PCR方法扩增基因，自65 ℃至50 ℃每降3 ℃循环3次，最后1个温度循环15次。PCR反应94 ℃变性30 s;所有循环反应结束后，72 ℃延伸10 min。引物由上海生工生物工程技术有限公司合成。以长100 bp DNA ladder(广州东盛生物有限公司)为Marker，于20 g/L琼脂糖凝胶上电泳检测 PCR产物。 表1 PCR检测 Hp vacA、cagA亚型的引物扩增区域引物编号引物序列(略)
1.4 统计学处理
采用SPSS 15.0统计学软件进行数据处理，数据间比较采用χ2检验。
2 结 果
2.1 Hp阳性率
105例病人中，快速尿素酶反应阳性84例，组织学检查Hp阳性57例，两者均阳性的标本57例，Hp阳性率为54.2%(57/105)。
2.2 vacA基因型检测
Hp阳性病人 vacA s1/m2、s1/m1、s2/m1、s2/m2 的阳性率分别为 53%(30/57)、18%(10/57)、8%(5/57)、21%(12/57)，vacA s1/m2阳性率与其他基因亚型相比，差异有统计学意义(χ2=5.07，P<0.05)。vacA基因型在CSG、CAG 和GC之间差异无显著性(P>0.05)。见表2。
2.3 cagA基因型检测
Hp阳性病人中cagA阳性率为89%(51/57)，阴性率为11%(6/57)，二者比较差异有显著意义(χ2=13.40，P<0.05)。cagA基因型在CSG、CAG 和GC之间差异无显著性(P>0.05)。见表2。表2 vacA与cagA基因型与胃疾病的关系(略)
3 讨 论
目前已经确认Hp是慢性胃炎的主要致病因子，是消化性溃疡发病及复发的主要因素，也是胃癌的一个重要危险因子[6]，世界卫生组织在1994 年将其列为人类胃癌的Ⅰ类致癌原。中国既
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