gt;0.05). ② The results of the experiment showed that there was no difference in the number of 5-HT3 receptor positive neurons in the myenteric plexus among each group (F=0.082, P=0.922). ③ The positive value of 5-HT4 receptor immunoreactive neurons in the myenteric plexus of IBS-D group (141.98±6.96) group was significantly higher than that in control group (159.90±2.55) (P<0.01). But there was no significant difference between IBS-C group (155.62±2.03) and the control group (P>0.05). Conclusion Increased number of 5-HT and 5-HT4 receptor positive neurons in the myenteric plexus may be related to the pathogenesis of IBS-D rat model.
KEY WORDS: irritable bowel syndrome; 5- hydroxytryptamine (5-HT); 5-HT3 receptor; 5-HT4 receptor
肠易激综合征(irritable bowel syndrome, IBS)是最常见的一种胃肠道功能紊乱性疾病，是一类具有特殊病理生理基础的身心疾病。罗马Ⅲ标准主要依据粪便性状将IBS分为IBS合并便秘(IBS with constipation, IBS-C)、IBS合并腹泻(IBS with diarrhea, IBS-D)、混合型IBS(mixed IBS, IBS-M)和未分型IBS(unsubtyped IBS, IBS-U)四种亚型。5-HT是一种与胃肠道活动关系密切的脑肠肽。目前已知胃肠道存在五种5-HT受体，即5-HT1、5-HT2、5-HT3、5-HT4受体和5-HT7受体，这些受体除了对胃肠运动及分泌功能有影响外，对胃肠道感觉功能也有作用。大量研究显示，5-HT及其受体与IBS的发病有密切的关系。但肠肌间神经丛内5-HT及5-HT3、5-HT4受体在IBS-C、IBS-D两种亚型之间有无差异尚无报道，即5-HT及其受体的可塑性对于IBS不同亚型的发病有无影响尚不明确。本实验通过检测这两型大鼠肌间神经丛的5-HT阳性肠神经元及5-HT3、5-HT4受体数量的变化，探讨5-HT及其受体的可塑性与IBS发病的关系及其对IBS亚型的影响。
1 材料与方法
1.1 实验动物及试剂
成年雄性SD大鼠27只，体重220-250 g，由第四军医大学实验动物中心提供。5-HT多克隆抗体购自武汉博士德生物技术公司;兔抗大鼠5-HT3受体多克隆抗体、兔抗大鼠5-HT4受体多克隆抗体购自MBL公司;DAKO Evision系统购自DAKO 公司;SABC即用型试剂盒、DAB显色试剂盒购自武汉博士德生物技术公司。
1.2 实验方法
1.2.1 动物分组与实验处理
成年雄性SD大鼠27只，随机分为IBS-D组、IBS-C组和对照组共3组，每组9只大鼠。①IBS-D组：采用乙酸灌肠的方法制备IBS-D动物模型。实验第8天处死大鼠。②IBS-C组[1]：采用冰水每日灌胃共14 d的方法制备IBS-C动物模型。实验第15天处死大鼠。③空白对照组。各组大鼠处死后，取距肛门7 cm的结肠片段1 cm，在生理盐水中漂洗干净后，立即固定在10%(体积分数)甲醛溶液中，4 ℃保存。结肠标本经常规脱水、透明，石蜡包埋，Leitz 1512型超薄切片机上连续切片，片厚3-5 μm，用5-HT的免疫组化方法检测大鼠肠肌间神经丛内5-HT的含量。另外取距肛门7 cm的结肠片段3 cm，制备出肠肌间神经丛的铺片，用5-HT3受体和5-HT4受体的免疫组化方法检测大鼠肠肌间神经丛的5-HT3受体和5-HT4受体含量的变化。
1.2.2 肠肌间神经丛内5-HT含量的检测
采用免疫组化ABC法，步骤如下：石蜡切片常规脱蜡至水;3
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