奥曲肽对人胃癌细胞增殖的抑制作用研究

　　1.8 统计学处理 采用SPSS 10.0软件包进行统计分析。数值均用x±s表示，均数间的比较采用t检验，P<0.05被认为有显著的统计学差异。

　　2 结 果

　　2.1 OCT对胃癌细胞增殖的作用 MTT法测定显示，1×10-8～1×10-6 mol/L的OCT对MKN45细胞的增殖均有抑制作用，以1×10-6 mol/L最为明显，抑制率为10.73%。各浓度组间比较亦有显著性差异。在1×10-8～1×10-6 mol/L浓度范围，OCT对MKN45细胞株的抑制作用随浓度的增高而增强(P<0.05)。与对照组相比，1×10-9 mol/L的OCT对MKN45的增殖无明显影响(P>0.05)。见表1。

　　OCT作用后MKN45细胞形成集落的能力明显降低，集落数减少〔对照组为(37±4.21)个，OCT组为(24±5.13)个，P<0.05〕，且形成的集落变小。裸鼠成瘤实验检测OCT组对MKN45细胞在体内是否有抑制作用，结果显示，接种MKN45细胞4周后处死裸鼠，OCT组瘤体平均体积显著小于对照组〔对照组(18.45±3.22) mm3，OCT组(12.32±1.82) mm3，P<0.05〕，提示OCT在体内对MKN45细胞的生长亦有一定的抑制作用。表1 奥曲肽对MKN45细胞增殖的影响 与对照组比较:*P<0.05

　　2.2 OCT对细胞周期的影响 流式细胞技术检测结果显示，OCT可诱导MKN45细胞阻滞于G0/G1期，并具有时间依赖性，其作用在加OCT后6 h出现，24 h最显著(P<0.05，表2)。但各时间点2组S期及亚二倍体细胞比例无显著差异。表2 奥曲肽对MKN45细胞周期的影响 与对照组比较：*P<0.05

　　2.3 OCT对胃癌细胞分泌TGF-α、EGF的影响 MKN45细胞的培养上清液中TGF-α、EGF的分泌量随培养时间延长而增加。培养液中加入OCT后， TGF-α、EGF的含量较对照组相应时间点明显减少。见表3、4。 表3 奥曲肽对MKN45细胞分泌TGF-α的影响表4 奥曲肽对MKN45细胞分泌EGF的影响与对照组比较：*P<0.05,**P<0.013

　　讨 论

　　胃癌是一种激素敏感性肿瘤。研究发现，胃癌细胞表面有多种激素受体如雌激素受体、胃泌素受体等。胃癌细胞自身也可分泌胃泌素、胰高血糖素、表皮生长因子等多种激素或生长因子。上述因子(内源性或外源性)可通过其相应受体对胃癌细胞的生长起调控作用[2-3]。关于胃癌激素治疗的研究逐渐增多，并已有部分应用于临床。

　　生长抑素是体内一种抑制作用广泛的激素，天然生长抑素的半衰期T1/2很短，只有2～4 min，不便于治疗和研究。近年来，多种生长抑素长效类似物已陆续被开发，迄今有6肽、7肽、8肽和14肽等多个系列，目前基于抗肿瘤目的应用的主要有奥曲肽(octreotide)、伐普肽(vapreotide)、兰瑞肽(lanreotide)及司格列肽(seglitide)等[4]，其中应用最多的是奥曲肽。奥曲肽为8肽类似物，T1/2长达1.5～2 h，广泛应用于急性胰腺炎、多种神经内分泌肿瘤等的治疗。近年来发现，奥曲肽在体内外对多种消化系实体肿瘤亦有明显的抑制生长作用[5，6]。但对其作用的机制仍未完全阐明。

　　本研究首先采用MTT比色分析法体外观察奥曲肽对胃癌细胞株MKN45增殖的影响，证实奥曲肽对其有抑制作用。进而采用平板集落形成实验和裸鼠成瘤实验证实OCT在体内外对MKN45细胞的增殖均具有明显的抑制作用。同时，我们采用流式细胞技术观察了OCT对细胞周期分布的影响，结果显示其可诱导细胞阻滞于G0/G1期，提示周期阻滞是OCT抑癌作用的机制之一，但OCT作用后未见明显的凋亡增加，提示OCT对MKN45细胞的增殖抑制并非通过促进凋亡实现。

　　肿瘤细胞生物学特性之一是自分泌调节。本研究采用的MKN45细胞亦具有该特性，培养上清中可检出TGF-α、EGF，分泌量在一定时间内呈时效关系。已知TGF-α、EGF的表达与胃癌的增殖有一定的相关性，其高表达可促进细胞的增殖[7]。本研究表明奥曲肽可抑制MKN45细胞分泌上述2种因子的能力，提示对生长因子的抑制是奥曲肽抑制肿瘤生长的重要机制之一。

　　本研究证实OCT对MKN45胃癌细胞的增殖有抑制作用，为其应用于胃癌辅助治疗提供了理论依据，为拓展奥曲肽的临床用药范围及肿瘤的激素治疗奠定了一定的实验基础

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