肺癌患者外周血淋巴细胞免疫分型检测的临床意义

　　1.2 实验方法

　　1.2.1 标本采集及处理 取肺癌组患者及对照组

　　健康体检者静脉血 3ml加入含肝素的抗凝管中混

　　匀后备用。取专用试管6支，各试管加入外周血标本100 μl，分别加入CD45-异硫氰酸荧光素(FITC)/CD14-藻红脘(PE),IgG1-FITC/IgG2a-PE，CD3-FITC/CD19-PE，CD3-FITC/CD4-PE，CD3-FITC/CD8-PE，CD3-FITC/ CD16(+)56-PE单克隆双色抗体15 μl，与之充分混匀，室温避光下孵育15 min，然后每管加入10×FACS(红细胞裂解液)溶血剂2 ml，充分混匀，室温避光下溶血10～15 min(15～22℃)至完全透明，1500 r/min离心10 min，弃上清液，PBS洗涤3次，每管加入0.5 ml PBS液悬浮，混匀放置室温下待测。

　　1.2.2 淋巴细胞免疫分型检测 用Becton-Dickinson公司生产的FACS Calibur型流式细胞仪测定。

　　1.3 统计学处理 本实验数据采用SPSS 11.0软件处理，检测结果以±s表示。肺癌患者与对照组之间的比较采用独立样本的双侧t检验， P<0.05为差异有显著性。

　　2 结 果

　　肺癌组外周血CD3(+)、CD4(+)、NK细胞比例及CD4(+)/CD8(+)比值均低于对照组(P<0.05)，而CD8(+)细胞比例高于对照组(P<0.05)，CD19(+)细胞比例与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。见表1。表1 肺癌患者与正常人淋巴细胞免疫分型的比较与对照组比较：*P<0.05

　　3 讨 论

　　机体免疫监视功能缺陷可能是肿瘤发生发展过程中的常见事件。随着对肿瘤病因的认识的深入，人们发现淋巴细胞亚群改变导致的免疫功能损害可能与肿瘤的发生、发展和预后相关，目前研究最多的是T细胞亚群的测定[1～2]。

　　T淋巴细胞不仅是细胞免疫的效应细胞，而且在调节免疫反应中起重要作用。T细胞亚群表面分子主要包括CD3(+)、CD4(+)和CD8(+)等。CD3(+) T细胞存在于所有成熟T细胞膜上，代表了宿主总的T细胞数量和细胞免疫状态。CD4(+)分布在辅助细胞诱导亚群和抑制细胞诱导亚群表面，又称T辅助或诱导细胞，在抗肿瘤免疫中起着积极的作用，其主要功能是通过分泌淋巴因子，增加和扩大免疫应答过程，辅助诱导其它免疫细胞共同发挥抗肿瘤作用。CD8(+)分布在抑制性T细胞和杀伤性T细胞表面，不仅具有负调节效应，同时具有维持抗肿瘤免疫记忆的功能，并能抑制B细胞产生抗体。CD4(+)/CD8(+)比例的恒定维持着细胞免疫反应的平衡，肿瘤抗原识别和杀伤分别通过CD4(+) T细胞和CD8(+) T细胞完成。Trojan等[3]研究表明，在非小细胞肺癌的患者中，CD8(+) T细胞虽然能浸润入肿瘤细胞中，但由于不能被充分激活而无法产生有效的抗肿瘤作用。Prado-Garcia等[4]发现CD8(+) T细胞亚群的比例不受T细胞产生的细胞因子刺激而改变，这种改变是导致肺癌患者抗肿瘤免疫效应低下的原因之一。此外，NK细胞也是机体免疫监视系统的主要组成部分，是机体抗肿瘤的第一道防线，参与T淋巴细胞、B淋巴细胞的调节，是细胞免疫中的非特异性成分。在多数情况下，NK细胞不依赖抗体、补体及预先致敏，可自发启动杀伤功能，并与单核细胞、粒细胞等协同发挥抗肿瘤、抗感染的免疫调节作用，但其活性可被肿瘤细胞分泌的免疫抑制因子抑制，从而降低机体对肿瘤的抵抗力。近年来的研究还表明：NK细胞不仅在非特异性抗肿瘤免疫中发挥重要作用，并且具有激活和增强重要的抗原递呈细胞树突状细胞(DC)的功能，因此，NK细胞起到连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁作用[5]。我们的研究发现，和对照组相比，肺癌患者机体免疫活性细胞比例存在异常，主要表现为淋巴细胞免疫分型比例失调，如CD3(+)、CD4(+)、NK细胞比例下降，CD8(+)细胞比例上升，CD4(+)/CD8(+)比值下降。提示肺癌患者存在免疫抑制和免疫调节功能紊乱，CD4(+) T细胞辅助诱导其它免疫细胞发挥抗

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