维生素C对硼替佐米诱导多发性骨髓瘤细胞株KM 3凋亡作用的影响

　　【摘要】 目的：为了研究维生素C对硼替佐米诱导多发性骨髓瘤细胞株KM-3细胞凋亡效应的影响。方法：采用细胞计数法检测硼替佐米15 nmol/L+10、20、40、80 μmol/L维生素C处理KM-3细胞生长抑制率，用流式细胞术分析Annexin-V/PI、线粒体跨膜电位(Δψm)和氧自由基(ROS)，用分光光度法检测Caspase3活性。结果：硼替佐米对KM-3细胞增殖抑制作用降低，24 hAnnexin-V阳性细胞比例下降，△ψm降低被阻止，18 h活性氧水平下降，16 h Caspase-3活性下降。结论：维生素C对硼替佐米诱导KM-3细胞凋亡效应具有抑制作用。

　　【关键词】 多发性骨髓瘤;维生素C;硼替佐米;凋亡;活性氧

　　Effect of Vitamin C on Bortezomib-induced apoptotic death in multiple myeloma cell line KM-3

　　ZHU Yunhong，XU Ruirong，HUANG Hongming，et al (Department of Hematology， the Affiliated Hospital of Nantong University，Nantong 226001)

　　[Abstract] Objective: To investigate the effect of Vitamin C on multiple myeloma cell line KM-3 apoptosis induced by Bortezomib. Methods: Cell viability inhibition ratio was estimated by counting method. Annexin-V，mitochondrial transmembrane potential(Δψm) and reactive oxygen species(ROS) labeled by DCFHDA were examined by flow cytometry， and the activity of Caspase-3 was detected by spectrophotometry. Results: The inhibition of Bortezomib on the multiple myeloma cell line KM-3 proliferation　was decreased， the ratio of Annexin-V positive cells at the 24th hour declined， the decrease of △ψm was prevented， the level of ROS at the 18th hour dropped， and the activity of Caspase-3 at the 16th hour declined. Conclusion: Vitamin C may abrogate the ability of Bortezomib to induce apoptosis on multiple myeloma cell line KM-3.

　　[Key words] Multiple myeloma;Vitamin C;Bortezomib;Apoptosis;Reactive oxygen

　　蛋白酶体抑制剂是近年来发现的一种靶向治疗肿瘤的药物。在真核细胞中80%以上蛋白降解是通过蛋白酶体介导的，蛋白酶体抑制剂通过对蛋白酶体的抑制剂发挥抗肿瘤作用[1]。硼替佐米是一种高选择性，可逆的26S蛋白酶体抑制剂，是第1个进入临床的该类药物。目前认为硼替佐米的主要作用机制是抑制I-κB在蛋白酶体内降解，使NF-κB停留在细胞质内，功能受抑制，失去抗凋亡效应和刺激细胞增生作用[1-2]。维生素C是一种多羟基化合物有清除氧自由基，抗氧化作用[3]。研究显示维生素C能增强三氧化二砷对高发性骨髓瘤(MM)疗效[4]。本实验探讨抗氧化剂维生素C对硼替佐米诱导多发性骨髓瘤KM-3细胞株凋亡的影响。

　　1 材料和方法

　　1.1 细胞培养 多发性骨髓瘤细胞株KM-3(由上海长征医院血液科侯健教授惠赠)置于含10%的胎牛血清(杭州四季青生物工程有限公司产品)的RPMI1640培养液(Gibco公司产品)中，于37 ℃、5%CO2和95%空气湿度条件下进行培养。实验过程中，细胞以1×105细胞/ml的密度接种培养。

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