he total white blood cells and the percentage of neutrophils in BALF decreased (F=146.77,106.63;q=10.29,12.42;P<0.01), the expressions of ICAM1 and MCP1 decreased (F=32.08,56.36;q=6.87,8.68;P<0.01) Conclusion ICAM1 and MCP1 involve in the process of airway inflammation, and LMWH relieves the inflammation probably by restraining the expressions of ICAM1 and MCP1.
[KEY WORDS] pulmonary disease, chronic obstructive; heparin, low molecular weight; cell adhesion molecules; monocyte chemoattractant protein1
慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种以肺部气流受限为特征的疾病。气流受限不完全可逆，呈进行性发展，这种改变与气道炎症密切相关[12]，气道炎症是COPD发病的重要机制之一。本研究通过熏吸香烟加气管内注入脂多糖的方法建立COPD大鼠模型，应用免疫组化法分别检测支气管肺组织中细胞间黏附分子1(ICAM1)和单核细胞趋化蛋白1(MCP1)的表达，以探讨二者在气道炎症中的作用及低分子肝素(LMWH)对气道炎症的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
健康雄性Wistar大鼠30只，12周龄，体质量(200±20)g，由青岛市药检所动物实验中心提供;LMWH(法安明，辉瑞比利时公司);脂多糖(LPS，美国Sigma公司);将军牌香烟(每支的焦油含量为15 mg、烟气烟碱含量为1.2 mg，山东中烟工业公司);兔抗大鼠ICAM1抗体、兔抗大鼠MCP1抗体(武汉博士德生物工程有限公司)
1.2 实验分组与动物模型建立
将Wistar大鼠随机分为正常对照组、COPD模型组、LMWH干预组，每组10只。模型制备：分别于第1、14天气管内注入LPS 200 μg(200 μL)，第2～40天(第14天除外)将大鼠置80 cm×60 cm×50 cm大小的有机玻璃熏箱内被动吸烟，每日熏烟2次，每次10支香烟，时间持续1 h，两次熏烟间隔时间4 h。COPD模型组熏烟前0.5 h给予1 mL生理盐水皮下注射，每天1次。LMWH干预组熏烟前0.5 h给予LMWH(剂量为150 U/kg)1 mL皮下注射，每天1次。
1.3 观察指标及方法
1.3.1 动脉血气分析 麻醉大鼠仰卧固定于操作台，分离腹主动脉，抽取动脉血0.5 mL，迅速进行血气分析。
1.3.2 支气管肺泡灌洗 迅速打开胸腔，心脏穿刺放血，结扎右肺，解剖暴露出气管，用0.1 mol/L的PBS液10 mL分3次行左肺支气管肺泡灌洗，肺泡灌洗液(BALF)总回收率为80%～90%，行细胞计数及分类。
1.3.3 病理学检查 自肺门处分离肺组织，取右下肺叶，置于40 g/L的中性甲醛溶液内固定24 h，常规梯度乙醇脱水、浸蜡、包埋、切片，行苏木精伊红染色，光镜下观察肺组织病理改变。
1.3.4 肺组织形态学定量 应用显微图像分析系统，每张组织切片随机选择5个视野，分别测量肺平均内衬间隔(MLI，反映肺泡的平均直径)、平均肺泡数(MAN，反映肺泡的密度)以及肺泡腔与肺总面积比(PAA)，取5个视野的平均值代表所测指标。
1.3.5 ICAM1、MCP1的检测 采用两步法在石蜡切片上测ICAM1、MCP1的免疫组化表达，一抗为1∶100的ICAM1和MCP1多克隆抗体，二抗为生物素山羊抗兔IgG，阴性对照标本除以PBS代替一抗外，其他步骤与被测标本相同，阳性反应为胞浆中出现棕黄色颗粒。结果采用多功能彩色病理图像分析系统处理，每张切片在高倍镜下(400倍)随机选择含支气管的视野5个，测量支气管肺组织阳性染色区域的平均积分吸光度(A)值，取其平均值代表所测指标的蛋白表达情况。
1.4 统计学处理
采用SPSS 11.5及PPMS 1.5[3]统计软件对结果进行统计学分析，组间比较采用方差分析
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