黄芪对阻塞性黄疸大鼠白细胞介素 2及可溶性白细胞介素 2受体表达的影响

　　1 材料和方法

　　1.1 动物和分组 健康雄性清洁级Wistar大鼠30只，体重250～300 g，由徐州医学院实验动物中心提供〔SCXK(苏)2002-0031〕，饲养室内温度控制在(24±2)℃。所有大鼠随机分成3组，假手术组、阻塞性黄疸组、黄芪干预组，每组10只。

　　1.2 试剂和仪器 戊巴比妥粉剂(西塘公司，上海);大鼠IL-2、sIL-2R定量ELISA试剂盒(美国BPB公司);黄芪注射液(中国杭州正大青春宝药业有限公司，国药准字号：Z33020179)。OLYMPUS AU7200全自动生化分析仪(OLYMPUS公司，日本);外科手术器械(上海医疗器械厂);自制大鼠固定手术台。

　　1.3 方法

　　1.3.1 手术方法 适应性喂养1周，术前禁食12 h，自由饮水。3%戊巴比妥生理盐水溶液，按40 mg/kg进行腹腔注射。麻醉10 min后，固定大鼠于手术台上，术区消毒、铺巾。上腹部正中切口，向外拉开肝脏，暴露肝十二指肠韧带，假手术组只分离肝十二指肠韧带而不结扎胆总管，阻塞性黄疸组、黄芪干预组均分离出胆总管以3-0号丝线结扎[2]。检查术野无出血，温生理盐水冲洗后4号丝线逐层缝合腹壁。

　　1.3.2 术后处理 术后灯照保温约0.5 h，麻醉清醒后自由进水、进食、活动;手术后， 黄芪干预组每日腹腔注射黄芪注射液3 ml。假手术组、阻塞性黄疸组相同部位注射等量生理盐水。各组大鼠均在手术后第2周再次麻醉，打开腹腔，下腔静脉采血,立即用离心机3 000 r/min离心15 min，取血清待检。

　　1.4 标本采集和检测指标

　　1.4.1 血清学检查 利用OLYMPUS AU7200全自动生化分析仪进行谷氨酸氨基转移酶(ALT)和直接胆红素(TB)测定。

　　1.4.2 IL-2、sIL-2R水平检测 严格按照试剂盒的要求进行操作。首先利用标准品建立标准曲线，充分反应后在492 nm测量光密度值。

　　1.4.3 肝组织的病理变化 剪取肝右叶组织置于40 g/L多聚甲醛固定，然后脱水、透明、浸蜡、包埋，制成4 μm厚的石蜡片，苏木精-伊红染色，显微镜(×100)观察病理变化。

　　1.5 统计学处理 采用SPSS 11.0软件对实验数据进行处理，以±s表示，采用方差分析。P<0.05认为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 大鼠一般情况 大鼠无麻醉和手术致死。造模后皮肤黏膜渐黄染，食欲减退，体重下降，精神差，嗜睡，反应迟钝，行动少，粪便呈白色。假手术组大鼠无上述变化。

　　2.2 血清学检查结果 黄芪干预组ALT低于阻塞性黄疸组(P<0.05)。见表1。表1 各组大鼠术后ALT和TB的变化 与假手术组比较：*P<0.01;与阻塞性黄疸组比较：☆P<0.05

　　2.3 IL-2、sIL-2R水平检测结果 与假手术组和黄芪干预组比较，阻塞性黄疸组大鼠IL-2水平降低，sIL-2R水平升高，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)见表2。说明黄芪可提高阻塞性黄疸大鼠机体免疫功能。表2 各组大鼠术后IL-2、sIL-2R水平检测结果与假手术组比较：*P<0.01;与阻塞性黄疸组比较：☆P<0.05

　　2.4 肝脏病理改变 假手术组肝色质正常，无腹水;阻塞性黄疸组和黄芪干预组肝门部近侧胆管呈囊样扩张，充满胆汁，阻塞性黄疸组有5只、黄芪干预组有3只有大量腹水。光镜下假手术组肝组织结构正常，阻塞性黄疸组有明显的小胆管、毛细血管及结缔组织增生，肝细胞肿胀、空泡变性并有灶性坏死，部分肝细胞坏死呈片状及有大量炎性细胞浸染。黄芪干预组的肝脏病理改变明显较阻塞性黄疸组轻，即使肝细胞坏死也呈小片状(图1)。

　　3 讨 论

　　阻塞性黄疸对机体免疫功能有多方面的损害，其中以细胞介导的免疫损害尤为明显，由于免疫功能受损机体防御功能下降，阻塞性黄疸患者并发症发生率高。本实验以IL-2和sIL-2R为检测指标来反映阻塞性黄疸大鼠

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