2.5.3 MDA测定
按试剂盒说明书操作。测定原理:过氧化脂质的分解产物MDA在醋酸酸性条件下加热,与硫代巴比妥酸反应生成红色产物,在532 nm处有最大吸收峰。用分光光度计测定其吸光度。通过公式求出被测样品MDA含量。
1.2.6 病理染色
取肾皮质用10%的福尔马林固定,经过常规酒精脱水、二甲苯透明,然后进行浸蜡、包埋,制成2 μm厚切片,进行HE染色、PAS染色。①HE染色:常规石蜡切片脱蜡至水,苏木素染色5 min,自来水冲洗,1%盐酸酒精分化5 s,再用自来水充分洗涤,1%氨水返蓝数秒,1%伊红染色3 min,自来水冲洗,酒精梯度脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。②PAS染色:常规石蜡切片脱蜡至水,1%过碘酸染色15 min,蒸馏水冲洗,Schif试剂反应30 min,0.5%亚硫酸钠处理2 min共3次,流水洗5~10 min,苏木素复染5 min,自来水冲洗,1%盐酸酒精分化数秒,再用自来水冲洗,酒精梯度脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。
1.3 统计学处理
采用SPSS11.0进行统计学分析。计量资料采用x±s表示,多组间计量资料比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验。
2 结 果
2.1 SF对肾IRI肾功能的影响
正常组与假手术组比较无显著性差异;模型组及治疗组与正常组及假手术组相比BUN、SCr水平均明显上升,有显著性差异(P<0.01);治疗组与模型组相比BUN、SCr水平明显下降,有显著性差异(P<0.01)。见表1。表1 SF对肾IRI肾功能的影响(略)
2.2 SF对肾IRI组织氧化指标的影响
假手术组SOD、MDA含量与正常组比较无显著性差异;假手术组与模型组相比SOD含量明显减少、MDA含量明显增加,有显著性差异(P<0.01);治疗组与模型组相比SOD含量明显增加、MDA含量明显减少,有显著性差异(P<0.01)。见表2。表2 各组大鼠肾组织氧化指标变化(略)
2.3 SF对肾IRI组织病理学的影响
各组大鼠肾脏外观及颜色基本正常,正常组及假手术组大鼠HE切片未见明显的形态学改变。模型组肾脏微肿胀、颜色稍暗,切开见皮髓分界欠清,镜下主要为肾间质改变,可见明显的肾小管上皮细胞水肿、空泡变性、基底膜皱缩、刷状缘消失、核碎裂等;治疗组上述病理改变虽然没有恢复正常,但是较模型组明显减轻。见图1。
3 讨 论
IRI的概念由Jenning于1960年首次提出,指缺血组织或器官重获血流灌注或氧供应后,对组织或者器官所产生的损伤作用〔4〕。肾脏是人体中容易受到缺血以及IRI的器官之一。肾脏IRI是急性肾衰竭的常见原因,也是肾脏移植术后影响移植物早期功能恢复和移植物长期存活的主要因素之一〔5,6〕。肾脏IRI是由多因素、多途径,多方面介导的复杂过程。再灌注时组织内氧自由基(O2)等自由基大量增加,O2具有极强的氧化活性。在正常情况下,O2可以被内源性自由基清除剂如SOD、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)和维生素等清除,但当组织细胞缺血缺氧时,氧自由基清除系统功能降低或丧失,而生成系统却活性增强,一旦恢复组织血液供应和氧供,O2便大量产生与急剧“堆积”,以不同方式造成细胞急性或慢性损伤〔7〕。
本实验采用无损伤动脉夹夹闭大鼠肾蒂45 min后再灌注,导致血清BUN,SCr含量与假手术对照组相比明显增高,且血清BUN,SCr测定值于再灌注后较单纯缺血时明显增高。BUN及SCr是机体代谢产生的非蛋白含氮化合物,主要经肾排泄,而其血清含量增高是由于肾缺血再灌注时肾小球及肾小管上皮细胞损伤,导致肾小球滤过率下降,BUN及SCr不能顺利排出,证实已造成肾急性IRI。
SF即3-甲氧基-4-羟基-苯丙烯酸钠,是阿魏酸(Ferulic Acid,FA )(4-羟基-3-甲氧基肉桂酸)的钠盐,FA普遍存在于当归、川芎、蜂胶、酸仁枣等中药材中,属酚酸类化合物。结构中有酚羟基,具抗氧化活性,但在空气中不稳定,故临床常应用其钠盐。SF被证明是一种新的非肽类内皮素受体拮抗剂(E-TRA)〔8,9〕,可拮抗内皮素引起的血管收缩、升压及血管平滑肌细胞增殖;抑制血管收缩物质血栓素A2(TXA2),增加一氧化氮(NO)的合成,松弛血管平滑肌;抑制血小板聚集、抗凝血、改善血液流变学特征;具有抗氧化和自由基清除作用;有免疫调节作用,能阻止活化补体引起的中性粒细胞聚集,对补体激
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