阿魏酸钠对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用

　　【关键词】 肾;缺血再灌注损伤;阿魏酸钠

　　目前已经有大量的研究表明阿魏酸钠(SF)对肾脏有明显的保护作用，而且临床应用也比较多，尤其对于糖尿病肾病(DN)的肾脏保护作用，更是近年来国内外研究的热点且已被研究证实〔1，2〕。同时其对心肌缺血再灌注损伤(Ischemia-reperfusion injury，IRI)的保护作用也已逐渐被认可〔3〕，但是关于其在肾脏IRI方面的研究目前还很少。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 实验动物与分组

　　清洁级雄性Wistar大鼠32只，体重200～250 g，购于吉林大学第二医院动物中心，自由进食、水。

　　1.1.2 主要药品与试剂

　　科强SF注射液(吉林西点药业提供);尿素氮(BUN)测定试剂盒及血清肌酐(SCr)测定试剂盒(北京北化康泰临床试剂有限公司);丙二醛(MDA)测定试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)及考马斯亮蓝法蛋白测定试剂盒(江苏南京建成生物工程研究所)。

　　1.2 方法

　　1.2.1 肾脏IRI模型制备

　　术前禁食6 h并于术前称重，腹腔注射氯胺酮麻醉(2 ml/kg)。将大鼠仰卧固定于操作台上，腹部备皮，75%酒精消毒，暴露手术区域。取上腹部正中切口，自剑突下起，约长5 cm，打开腹腔。用生理盐水浸湿的无菌纱布牵开腹腔脏器，暴露右肾，钝性分离右肾肾蒂，以3-0幕丝线双道结扎右肾蒂;同样暴露并钝性分离左肾肾蒂。以无创伤血管夹夹闭左肾动静脉，并开始计时，观察左肾颜色：由红润变为苍白表示夹闭有效。45 min后移去血管夹，观察肾脏颜色：恢复红润，提示再灌注良好。以3-0幕丝线逐层关闭腹膜、腹白线和皮肤，用75%酒精消毒伤口，待完全苏醒放回饲养笼中。

　　1.2.2 动物分组

　　将Wistar大鼠随机分为4组，每组8只，分别行以下处理：①正常组：仅给予110 mg·kg-1·d-1的生理盐水灌胃7 d，不作手术;②假手术组：给予110 mg·kg-1·d-1的生理盐水灌胃7 d后，做肾脏IRI模型，手术仅暴露肾脏45 min，不阻断肾蒂;③模型组：给予110 mg·kg-1·d-1的生理盐水灌胃7 d，再做肾脏IRI手术模型;④治疗组：给予阿魏酸钠110 mg·kg-1·d-1灌胃7 d，再建立大鼠肾脏IRI模型。各组均于再灌注24 h后留取标本、处死。

　　1.2.3 标本采集

　　腹腔注射氯胺酮(2 ml/kg)麻醉大鼠，从心脏抽血2 ml注入试管中，将试管置于离心机内，1 500 r/min离心5 min，留取血清。随后迅速开腹腔，留取肾组织，将肾组织一部分置于-70℃冰箱中储存，用于氧化指标的测定，其余部分迅速浸入10%的福尔马林固定液中。

　　1.2.4 血生化的测定

　　血清标本采用检测试剂盒在本科实验室自行检测BUN、SCr。具体操作按试剂盒说明进行，比色法测定含量。

　　1.2.5 肾组织SOD、MDA测定

　　1.2.5.1 组织匀浆制备 测定时样品于低温环境下称重，置于含有冷生理盐水的离心管中(离心管放在冰水中)。用超声波细胞粉碎机制成10%的组织匀浆液。将肾组织匀浆用低温离心机以3 500 r/min离心10～15 min，取适量上清液用于SOD活性和MDA含量的测定。

　　1.2.5.2 SOD测定

　　黄嘌呤氧化酶法测定SOD的活力。测定原理：通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测定其吸光度，通过公式计算出被测样品中的SOD活性。

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