慢性高原病患者骨髓组织Survivin 及VEGF表达水平和MVD变化

　　1.4.1 Survivin和VEGF染色结果判定标准：Survivin及 VEGF蛋白阳性表达为棕黄色颗粒,主要存在于细胞胞浆。为精确判断蛋白的表达程度及减少假阳性率,记分标准参照许良中等[2]的方法,随机选择10个高倍视野共记录1000个细胞,根据细胞浆的着色程度及着色细胞的百分率进行评分计算阳性系数：基本不着色者为0分,着色淡者为1分,着色适中者为2分,着色深者为3分。着色细胞占计数细胞百分率≤5%者为0分, 6% ～25%者为1分, 26%～50%者为2分, ≥51%者为3分。将每张切片着色程度得分与着色细胞百分率得分各自相乘,即为阳性系数。阳性系数为0、1分者为(-),2、3分者为(+),4、6分者为(++),9分者为(+++)。

　　1.4.2 CD34结果及MVD判定标准：采用抗CD34单克隆抗体标记血管内皮细胞，CD34定位于血管内皮细胞胞膜，棕染。计数MVD，由此来衡量血管生成的活跃程度。参照Weidner法[3]先在低倍镜(×100)下选取组织微血管数量最丰富的区域，然后在高倍镜(×400)视野范围计算3个视野血管的数目，取其平均值作为MVD。微血管判断不以红细胞的出现来确定是否是血管，也不以是否出现管腔来计数血管，凡染色呈棕色的单个内皮细胞或内皮细胞簇，只要它们和邻近的微血管或其他结缔组织分开，就视为一个微血管，只要结构不相连，其分支结构也作为一个血管计数。凡管腔大于8个红细胞大小、带有较厚肌层的血管均不计数。同法顺序计数多个高倍视野，取平均值，最终结果表示为每高倍视野平均微血管数。两人计数相差10%以上者重新计数。

　　1.5 统计分析

　　Survivin及 VEGF检测结果以阳性率表示，MVD值以均数士标准差(x±S)表示。所有结果均应用统计软件SPSS16.0进行处理,Survivin和VEGF的阳性表达率比较采用Fisher精确概率分析, MVD比较采用独立样本t检验 ，Survivin阳性表达率、 VEGF阳性表达率 、MVD及Hb相互之间的相关性采用Spearman相关分析。

　　2 结果

　　2.1 研究对象一般资料(表1)表1研究对象一般资料

　　2.2 骨髓组织中Survivin及VEGF的表达和MVD检测结果

　　Survivin在CMS组14例表达呈阳性(70%)，对照组 4例表达呈阳性(26.67%)，两组间差异具有显著性(P<0.05)(见图1～2)。VEGF在CMS组15例表达呈阳性(75%)，对照组5例表达呈阳性(33.33%)，两组间相比差异具有显著性(P<0.05)，见图3～4。CMS组 MVD为31.93±6.13，明显高于对照组(24.94±6.18，P<0.01)(见图5～6),见表2。表2骨髓组织中Survivin及VEGF的表达和MVD检测结果

　　2.2 CMS骨髓组织中, Survivin、VEGF、 MVD及Hb相互之间的相关性

　　CMS组Survivin阳性表达率、VEGF阳性表达率、MVD及Hb相互间均呈显著正相关(均为P<0.01)。图1 Survivin在CMS组中的表达(×400)

　　3 讨论

　　低氧血症是CMS的病理生理特征之一，CMS患者处于严重的低压缺氧状态。缺氧是VEGF表达的最主要的调节因素之一。Walienbergeer等[4，5]研究证明缺氧条件下，VEGF诱导内皮细胞有丝分裂敏感性增加是由于VEGF特异性受体KDR(Kinase domaine insert containing receptor)的酪氨酸磷酸化作用加强;缺氧时KDR升高 13 倍，而 KDR与VEGF的结合力不变，说明缺氧不仅是诱导了VEGF的增加，也通过旁分泌诱导VEGFR 数量和功能的增加和增强，致使VEGF的生物效应增强。本实验显示CMS组织中VEGF的表达显著高于正常人,此结果与王洪斌等[6]及颜金花等[7]在CMS患者中观察到的血浆和血清VEGF水平变化结果相一致,提示在机体对低氧环境处于失代偿时VEGF的表达明显增高,作者认为这与VEGF的表达调节机制有关。VEGF作为缺氧反应基因(HRGs)之一，其表达受上游的HIF-1调节。HIF-1作为缺氧应答的全局性调控因子，是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内的一种转录因子，主要受细胞内氧分压调节。当机体在高原环境下失代偿时，组织细胞内的氧分压明显降低，强烈刺激HIF-1的表达，进而上调VEGF表达，而当机体处于代偿状态时，组织细胞氧分压尚能维持在

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