ng, VEGF ,MVD and Hb each other (all P<0.01) .Conclusion The results of this study shows that there are over expressions of surviving, VEGF, and the MVD increased in bone marrow of CMS. It is suggested that the survivin and VEGF may play a crucial role in generation and progression of CMS through contributing to the angiogenesis and the erythrocyte proliferation in CMS.
Key words Survivin Vascular endothelial growth factor Microvessel density
高原人群中的少数个体因对高原环境失去习服而发生慢性高原病(chronic mountain sickness，CMS)。其病变以红细胞过度增生和严重低氧血症为特征，部分病人伴有一定程度的肺动脉高压。发病机理非常复杂，涉及红细胞增殖、分化、凋亡等环节，迄今尚不完全清楚。长期以来，国内外学者对CMS进行了广泛研究，其内容涉及形态学、代谢、造血细胞因子、细胞凋亡、缺氧诱导因子、凝血系统及血管新生等诸多方面。近年来细胞凋亡和血管新生在疾病中的作用愈来愈受到重视。凋亡抑制蛋白 (Survivin)作为凋亡抑制蛋白(IAP)家族的新成员，参与细胞周期及细胞凋亡和增殖平衡的调控、血管生成等病理生理过程。血管形成过程的核心是血管内皮细胞的增殖。血管内皮生长因子 (VEGF)是作用于血管内皮细胞的特异性有丝分裂原,通过旁分泌的方式与其受体VEGFR-1(flt-1)和VEGFR-2(KDR/flk-1)结合后，活化磷脂酞肌醇3激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K),促进内皮细胞的增殖和血管形成。CD34是一种分子量为105～120KD的单链穿膜蛋白,表达于早期淋巴造血干细胞、祖细胞、血管内皮细胞、胚胎纤维母细胞和某些神经组织细胞,现多用于标记血管内皮细胞。本实验采用免疫组织化学方法,选用CD34单抗标记血管内皮细胞用以测定微血管密度(MVD)，并联合检测Survivin和VEGF在CMS骨髓组织中的表达情况,分析Survivin、VEGF、MVD之间以及与Hb间的相关性,旨在探讨细胞凋亡相关因子及血管新生在CMS发生发展过程中的作用,为临床评估CMS的发展和预后提供重要的基础理论依据,并为CMS的临床干预提供新靶点。
1 材料与方法
1.1 研究对象
20例CMS患者为我院2007至2008年门诊及住院病人(CMS组)，均为男性，平均年龄40.8±8.42岁，按第六届国际高原医学和低氧生理学术大会制订的慢性高原病诊断标准确诊[1]。以15名西宁地区(海拔2260m)世居男性健康志愿者作为对照组，平均年龄39.27±10.46岁。所有研究对象均进行血常规、尿常规、心电图、X线胸透、肝功能及B超检查,排除各种急、慢性感染及原发性心、肺、肝、肾疾患和其他严重疾病。两组间年龄无统计学意义(P>0.05)。
1.2 标本采集及处理
1.2.1 外周血采集及处理：采集空腹静脉血5ml注入含有枸橼酸钠的试管中充分混匀,行血细胞分析。
1.2.2 骨髓组织的采集及处理：所有患者均行骨髓活检术。骨髓标本均经过10%甲醛溶液固定,脱钙，石蜡包埋。
1.3 检测方法
Survivin及VEGF应用免疫组织化学SP法检测，MVD通过计数CD34单抗标记的血管内皮细胞检测。免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来对组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)进行定位、定性及定量的研究。所应用的主要试剂包括：即用型兔抗人Survivin免疫组化单克隆抗体，即用型鼠抗人VEGF免疫组化单克隆抗体，即用型鼠抗人CD34免疫组化单克隆抗体，即用型SP免疫组化染色试剂盒，即用型DAB试剂盒均购自福建迈新生物技术开发有限公司。所有标本行4 μm厚连续切片。切片常规脱蜡行Survivin、VEGF和CD34的免疫组织化学SP染色。
1.4 结果判定标准
所有染色切片均由两位富有经验的病理医
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