was increased in the early stage of pulmonary fibrosis and reduced after treatment with NAC and Tetramethylpyrazine(P<0.05).Conclusion NAC and Tetramethylpyrazine may increase GSH and decrease MDA. NAC and tetramethylpyrazine inhibit alveolitis and fibrosis by decreasing oxygen free radicals and TGF-β.This might be one of the mechanisms of antioxidant treatment in pulmonary fibrosis. It is suggested that antioxidant might be a therapeutic drug for pulmonary fibrosis.
Key words: Pulmonary fibrosis; Bleomycin; N-acetylcysteine; Tetramethylpyrazine; TGF-β; Mouse
肺纤维化是临床常见病理改变，是多种不明病因肺间质疾病的共同结局，往往导致肺功能障碍及呼吸衰竭，近年来其发病更有增多趋势。但该病发生机制尚未完全明了，治疗效果尚不理想，患者常因呼吸衰竭而死亡。近年来研究表明，氧化――抗氧化失衡是肺纤维化机制之一。肺纤维化早期为肺泡炎，由肺泡炎最终出现不可逆肺纤维化。肺泡炎表现为组织损伤和炎症病变，氧自由基释放，使氧化――抗氧化系统失衡，造成肺损伤，促进肺纤维化发生。本实验以博莱霉素(BLM)所致小鼠肺间质纤维化为模型，观察NAC和川芎嗪对抗氧化物质谷胱甘肽(GSH)和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的作用，以及对TGF-β的影响，探讨抗氧化剂对肺间质纤维化的干预作用及其机制。
1 材料与方法
1.1 动物雄性昆明小鼠，体重18~22 g。实验前置于20~25 ℃的空调房间。给予复合饲料，饮水不限。
1.2 主要药品和试剂博莱霉素：每支15 mg，日本化药株式会社生产，批号X20270。富露施(即N-乙酰半胱氨酸颗粒)，海南金晓制药有限公司生产，批号02803/02。利川(盐酸川芎嗪注射液)，安徽双鹤药业有限责任公司，批号0308021D。GSH测试盒(南京建成生物科技研究所)。MDA测试盒(南京建成生物科技研究所)。小鼠TGF-β1 ELISA试剂盒 (上海森雄科技实业有限公司)。3%戊巴比妥钠、甲醛、生理盐水等。
1.3 主要仪器和设备721可见光分光光度仪(上海)。超低温冰箱(SANYO ULTRA LOW NDF-382,日本)。高速冷冻离心机(KDC-160HR,科大创新公司)。恒温水浴箱、组织匀浆机、冷冻管等。
1.4 动物分组和标本收集处理雄性昆明小鼠50只，随机分为4组。BLM模型组：15只，小鼠气管内一次性注入BLM 5 mg/kg，按陈祥银等[1]报道的方法制成肺间质纤维化模型;NAC治疗组：15只，模型制作同博莱霉素模型组，给予胃管内注入NAC 80 mg/kg，每日一次;川芎嗪治疗组：模型制作同博莱霉素模型组，给予腹腔注射川芎嗪40 mg/kg，每日一次。上述三组分别于灌注BLM后第 7、14、28 d各组处死动物5只。对照组：5只，小鼠气管内注入等量生理盐水，7 d后处死。动物处死后，气管内进行灌洗收集BALF，取出双肺组织，右肺经10%甲醛固定，进行HE和Masson三色染色;左肺存于Eppendorf管，置-80 ℃保存，供测GSH和MDA。BALF存于-80 ℃保存，供测TGF-β用。
1.5 检测指标和方法肺组织匀浆GSH、MDA的检测：按GSH、MDA检测试剂盒说明书严格操作。ELISA法检测BALF中TGF-β蛋白量，根据试剂盒提供的方法进行反应，终止反应后用酶联仪测450 nm光密度(OD)，结果与标准曲线比较确定TGF-β含量。肺组织病理分析：肺组织经不同浓度酒精常规脱水、石蜡包埋、切片后，分别予以HE和Masson三色染色。根据Szapiel[2]提供的方法确定肺泡炎和肺纤维化程度，进行病理半定量分析。
1.6 统计学处理应用SPSS10.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，进行F检验和q检验，病理半定量结果采用非参数秩和检验。P<0.05有统计学意义。
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