d metastasis of human colorectal carcinoma;p27 was speculated to be likely one of the most important index to reflect the biological behavior of the malignant tumor and predict prognosis of colorectal carcinomas;p38 was likely a negative regulator of p27 by promoting its degradation .
Key words:Colorectal carcinoma;p38;p27;immunohistochemistry
细胞周期负性调控因子p27是近年发现的细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂CKI家族中的重要一员。有丝分裂原激活蛋白激酶p38是其家族重要成员，炎症前因子和应激反应可使p38的酪氨酸和苏氨酸双磷酸化，激活p38[1]。p38活化后可使多种转录因子活化，调节细胞增殖。癌变是正常细胞分化异常、增殖过度与凋亡受阻的结果， MAPK信号传导通路异常对癌变起重要影响作用。p38 和p27与大肠癌的相关研究国内外报道少见。本课题旨在阐明p38、p27与大肠癌的发生、发展及预后的关系。
1材料与方法
1.1一般资料
连续收集郧阳医学院附属人民医院2003年9月-2004年10月手术切除的大肠癌标本46例(男26例，女20例，<50岁14例，≥50岁32例),均经病理检查确诊,并同时采集大肠肿瘤周围正常大肠组织(距肿瘤边缘大于5 cm)立即用4%多聚甲醛固定。所有病人术前未经放化疗处理。
1.2试剂
兔抗人p38 、p27多克隆抗体，浓缩型SABC免疫组化染色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.3实验方法
操作步骤严格按试剂盒说明进行。将石蜡包埋标本制成4 μm厚的切片，常规脱蜡至水化，经3%H2O2灭活内源性酶，分别与一抗(兔抗人p38、p27多克隆抗体，1∶100稀释)，二抗(生物素标记羊抗兔IgG)孵育，DAB显色，苏木素复染，封片观察。
1.4免疫组化结果的判定
免疫组化结果通过双盲法经2位有经验的病理专家独立评估。阳性p38染色位于胞质，阳性p27染色主要位于胞核，仅少量在胞质。每张切片随机选取10个高倍视野(×400)，分别计数100细胞。10个视野阳性细胞平均百分率被认为是阳性百分率。没有阳性细胞赋值为0，<30%赋值为1，31%~70%赋值为2，>70%赋值为3。染色程度标准据每张切片大多数细胞染色特征来决定。没有染色赋值为0，浅黄色赋值为1，棕黄色赋值为2，棕色赋值为3。最终结果由染色总数和染色强度共同决定。如果总值为0，为阴性，总值1~2之间，为弱阳性，总值3~4之间为中等阳性，总值5~6之间，为强阳性，总值2以下，为低表达，总值大于3，为高表达。
1.5统计处理
计数资料采用χ2检验进行统计分析。
2结果
2.1p38、p27在大肠癌及其正常大肠组织中的表达
p38表达定位于胞质中，呈棕黄色，胞核中无表达;p27表达主要定位胞核中，呈棕黄色，胞质中偶有少量表达。p38在大肠癌中的阳性表达率为95.65%，正常大肠组织中阳性表达率为33.13%，两者差异有显著性(P<0.01,表1);p27在大肠癌中的阳性表达率为56.5%，正常大肠组织中阳性表达率为87.0%，两者差异有显著性(P<0.01,表1)。表1 p38、p27在大肠癌及正常大肠组织中的表达 p38、p27表达与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位均无相关性(P>0.05,表2)，与Dukes分级、肿瘤分化程度及淋巴结转移密切相关，经统计处理，差异有显著性(P<0.01,表2)。 表2 p38、p27在大肠癌组织中的表达与临床病理特征的关系 p27高表达正常大肠组织中p38呈低表达，p27低表达大肠癌组织中p38呈高表达，组织分化程度越低，p27表达越低，p38表达越高,两者呈负相关。
3讨论
有丝分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activate protein kinases,MAPK)是一个非常重要的细胞内信号传导酶超家族，介导机体细胞的生长、分化、分裂、死亡等多种过程[2]。p38是MAPK家族重要成员，含有360个氨
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