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纤维蛋白原是冠心病的独立危险因素之一 |
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64例。正常对照组470例,年龄26～87岁，平均年龄（57.9±11.2岁,男390例,女80例(403例冠脉造影显示管腔狭窄<50%,对照组中67例为阜外医院健康职工体检者)。两组性别年龄相匹配，不具统计学差异（P>0.05）。
1.2 研究方法 晨起空腹12 h，采肘静脉血。3.8％枸橼酸钠血浆标本用于Fbg浓度测定，采用凝血酶法。Fbg (HaeⅢ多态位点检测具体参照文献Humphries SE等[6]提供的方法。DNA提取采用酚/氯仿抽提法，Fbg (HaeⅢ455)酶切位点检测采用PCR加HaeⅢ酶切技术。
上游引物序列：5’GGAATGCAATCTCTGCTACCT3’
下游引物序列：5’TGTCGTTGACACCTTGGGAC3’
PCR循环（94℃预变性90 s； 93℃变性30 s，61℃ 退火30 s，72℃ 延伸90 s，共30次循环）扩增目的基因片段长度1.3 kb。见图1。
图1 PCR扩增目的基因片段示意图
图中第一个HaeⅢ酶切 位点在人群中不存在碱基突变，第二个HaeⅢ酶切位点在人群中发现有碱基突变，仅仅是表现突变率的不同，受种族差异和遗传因素的影响
PCR产物行1% 琼脂糖凝胶电泳检测（电压100 mV，电泳1 h），超紫外灯显影。见图2。
图2 PCR扩增目的基因片段
A：pBR322DNA/BstNI Marker(自下而上bp片段依此为：1857 bp，1058 bp，929 bp，383 bp)。B，C，D，E，F为PCR产物(1.3 kb长)。
取PCR产物30(l，加HaeⅢ内切酶10～20 u，37℃水浴消化2～4 h，反应产物经2％琼脂糖凝胶电泳（电压100 mV，电泳40 min），超紫外灯显影判定结果。见图3、4。
图3 1.3 kb PCR产物经HaeⅢ酶切后
H1H1基因型呈现3条带型，H2H2基因型呈现2条带型，H1H2基因型呈现4条带型。
图4 H2H2 . H2H2 空白H1H2. H1H1 .H1H1. Marker
（pBR322DNA/BstNI Marker自下而上bp片段依此为：1857bp，1058bp，929bp，383bp）。
血脂测定采用标准酶法；对患者详细询问并记录病史。高血压病、糖尿病入选标准：① 既往有明确高血压病、糖尿病诊断者;② 本次入院确诊者。每日吸烟1支以上超过1年定为吸烟者。
1.3 统计学处理 所有数据经SPSS 11.0统计软件进行分析；计量资料以x±s表示，组间比较采用t检验。计数资料或百分比的比较采用χ2检验。CHD诸多危险因素分析采用Logistic回归分析方法；纤维蛋白原影响因素采用Pearson相关分析，P<0.05为差异有显著性。
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