|
习惯性流产的抗凝血酶原抗体IgG IgM检测的初步应用 |
| |
TT皆正常，年龄25～39岁，中位年龄28岁。
采集静脉血，用枸橼酸钠（109 mmol/L）抗凝（1∶9），于22°C，2 500 r/min，离心15 min，制备乏血小板血浆。
1.3 ELISA定量测定血浆aPT IgG、IgM 以PBS稀释的病人凝血酶原4°C过夜，包被微孔板（10 μg/ml，每孔100 μl）。缓冲液（0.1%TweenPBS）洗涤3次后，封闭液（1%BSA0.1%TweenPBS）室温封闭2 h（每孔200 μl）。加入以封闭液1∶50稀释的待测血浆（每孔100 μl），室温反应1 h。洗涤5次，加入以封闭液1∶20 000稀释的碱性磷酸酶标记的山羊抗人IgG或IgM（每孔100 μl），室温孵育1 h。洗涤5次，加入新鲜配制的底物溶液（pNPP 1 mg/ml，二乙醇胺10 mM，MgCl2 0.5 M，pH 9.8，每孔各50 μl），室温显色后，加3 M NaOH终止反应（每孔50 μl），405 nm读取吸光度（A）值。空白对照孔以封闭液代替待测血浆。我们设定一高滴度aPT IgG或IgM病人的血浆aPT IgG或IgM含量为100％，经系列倍比稀释后建立标准曲线。待测血浆aPT IgG或IgM可通过A值查标准曲线，结果以相当于标定血浆的百分数表示。所有的样本均设立复孔，取其平均值。连续测定40份正常人新鲜乏血小板血浆，以其几何平均值＋2SD作为参考值上限。
2 结 果
2.1 标准曲线 以一高滴度aPT IgG或IgM病人的血浆，经系列倍比稀释后建立标准曲线。稀释度范围（1∶1600～1∶50）内，即对应于aPT IgG 或IgM 3%～100%内，aPT IgG或IgM活性的对数值与A 405有着极好的线性关系（R2=0.923）。
2.2 方法的批内和批间精密度 将2份不同含量的标本一板内重复测定10次，CV分别为4%（平均含量为39%）和6%（平均含量为91%）。同样地，将这二样本连续测定5批，CV分别为6%（平均含量为39%）和7%（平均含量为91%）。
2.2 两组aPT IgG、IgM、IgG+IgM检测 采用本法分别对原因不明习惯性流产组和正常对照组检测aPT IgG、IgM、IgG+IgM。原因不明习惯性流产组患者血清中抗凝血酶原抗体IgG、IgM、IgG+IgM阳性率分别为14.3%、11.4%、20%，对照组分别为2.5%、2.5%和5%，P值分别为0.073、0.14及0.05，提示原因不明习惯性流产病人的aPT高于正常妇女。在原因不明习惯性流产病人中，aPT阳性的风险高于正常妇女，aPT的 IgG、IgM、IgG+IgM的OR值分别为6.5、7.8、4.9。见表1。表1 35例原因不明习惯性流产病人血清的aPT抗 体病例组阳性比
3 讨 论
针对磷脂－蛋白复合物的抗磷脂抗体已经被证明与部分血栓和习惯性流产有关。抗磷脂抗体的检测对于习惯性流产的诊断、预防和治疗均有重要意义[1]。抗凝血酶原抗体（aPT）是抗磷脂抗体家族主要成员之一，其与凝血酶原以低亲和力结合。当磷脂（或类似表面）与凝血酶原结合后，可以富集抗原位点或者使隐藏的抗原位点暴露，从而使得aPT与凝血酶原的结合大大增强，这是aPT发病机制和aPT检测方法的理论依据[2]。
上一页 [1] [2] [3] [4] [5] 下一页
上一个医学论文： 沙利度胺对血液肿瘤患者内皮细胞功能的影响
下一个医学论文： 直接凝血酶抑制物的测定及其临床意义
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 内科论文 >> 正文