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颈动脉支架置入术后循环血小板活化和聚集的系列变化 |
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sp;FACScan 溶血素，混匀后溶血10 min，300 r/min离心5 min，PBS洗1遍，再300 r/min离心5 min，弃上清后加入2～8℃预冷的1％多聚甲醛500 μl，置2～8℃冰箱24 h内测定。首先在侧向散射光（SSC）相对于 CD 14-PE的散点图上圈定单核细胞群并设门，分析2 000个单核细胞中CD 61阳性的单核细胞的百分比，由测定管和对照管的差值代表聚集体中有血小板的单核细胞的相对含量。
1.4.1.2 纤维蛋白原受体检测 分别取FITC标记的PAC-1和多甲藻黄素叶绿素蛋白（Percp）标记的CD 61各10 μl置试管中混匀为测定管；另取非特异性结合荧光素的IgM-FITC、CD 61-Percp各10 μl置试管中混匀为对照管，两管中分别加入5 min前采集的全血5 μl与试剂轻轻混匀,室温下避光作用20 min，加入2～8℃预冷的1％多聚甲醛500 μl，置2～8℃冰箱内2 h后，24 h内测定。以CD 61-Percp/SSC双参数设门，分析PAC-1阳性血小板的百分率，以测定管和对照管的差值代表血小板表达纤维蛋白原受体的相对含量。
1.4.2 比浊法的血小板聚集检测 抗凝血标本于室温下先后以1 000 r/min和3 000 r/min离心各10 min，先后吸取富血小板和贫血小板血浆。分别以二磷酸腺苷（ADP，5 μmol/L）、肾上腺素（EPN，5μmol/L）、胶原（COL，2.5 μg/ml）和花生四烯酸（AA，500 μg/ml）为诱导剂，检测血小板最大聚集率（MAR）。仪器与试剂均来自美国Helena Lab Corp．公司。全部过程于取血后2 h内完成。
1.4.3 血清可溶性CD 40配体（sCD 40L）和可溶性P-选择素（sP-selectin）的检测 sCD 40L（奥地利Bender MedSystem 公司）和sP-selectin（美国R&D System公司）均采用酶联免疫吸附法测定，按照试剂盒的操作说明进行。
1.5 统
计学处理 计量资料先采用One sample Kolmogorov-Smirnov正态性检验其是否符合正态分布，符合正态分布的参数以均数±标准差（x±s）表示，CAS前后系列时间的参数比较采用双因素方差分析；不符合正态分布的参数以中位数（25％，75％位数）表示，采用Friedman秩和检验。相关性分析采用Spearman秩相关分析。数据处理采用SPSS 11.0统计软件。
2 结 果
2.1 CAS前后FCM检测的PMA和PAC-1的变化 PMA和PAC-1在CAS术前即刻、术后0.5 h、18 h和6 d系列时间点的差异无统计学意义（P>0.05），见表1。表1 CAS前后PMA和PAC-1（中位数，25％-75％位数）的阳性百分数
2.2 CAS前后体外4种诱导剂诱导的血小板MAR的变化 4种诱导剂诱导的血小板MAR在CAS术前即刻、术后0.5 h、18 h和6 d系列时间点的差异无统计学意义（P>0.05）。4种诱导剂的MAR在CAS前后各时间点与健康对照组比较均有降低，差异有统计学意上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] 下一页
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