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急性脑梗死患者中性粒细胞活化的研究 |
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;CD 11b/CD 18和CD 62L的检测
1.2.1 标本采集 病例组及正常对照组清晨空腹经肘静脉采血2 ml（1∶9肝素抗凝），轻轻混匀，6 h内行流式细胞仪测定。
1.2.2 标本准备 采用双染色法，分别取实验组及对照组血标本100 μl加入20 μl藻红蛋白（PE）标记鼠抗人CD 11b单克隆抗体（PECD 11b，美国Beckman Coulter 公司）与异硫氰酸标记（FITC）标记鼠抗人CD 62L单克隆抗体（FITCCD 62L，美国Beckman Coulter 公司），避光静置，室温孵育20 min。先后加入IMMUNOPREP A液（美国Beckman Coulter 公司配方）650 μl破坏红细胞膜，以及IMMUNOPREP B液265 μl（美国Beckman Coulter 公司配方）保护白细胞膜，振荡均匀后流式细胞仪上机检测。每份样本均以大鼠抗小鼠PEIgG1及FITCIgG1（美国Beckman Coulter 公司）为阴性对照。
1.2.3 流式细胞仪检测 美国Beckman Coulter公司EPICSXL型流式细胞仪，利用Cellquest流式细胞图象数据分析软件，分析设定计数达到1×105次“事件”(events)后，检测中性粒细胞CD 11b/CD 18及CD 62L表达，然后用中性粒细胞对抗体的阳性表达率来表示实验结果。见图1。
1.3 细胞因子的检测
1.3.1 标本的采集与制备 于清晨空腹采静脉血3 ml，其中DVT组均为发病7 d以内，置未加抗凝剂的洁净生化管中，以离心半径8 cm, 3 000 r/min离心20 min分离血清，分别按1次用量分装，置-40℃冰箱保存备用。
1.3.2 检测方法 运用RIA法检测血浆IL6、IL8、TNFα水平，相应的放免试剂盒由中国人民解放军总医院科技开发中心放免所提供；用ELISA法检测血浆IL10水平，人IL10 ELISA试剂盒由美国R&D公司提供。方法均按照试剂盒操作步骤进行。
1.4 数据统计 各组数据以均数±标准差表示。两组间比较采用t检验。相关分析采用Pearson相关分析(双尾法)。所有统计学处理均由SPSS 11.4软件包完成。
2 结 果
2.1 两组外周血PMN表面CD 62L的表达 脑梗死组外周血CD 62L的平均抗体阳性表达率（61.058±8.925）%明显低于正常组(73.316±1.276)%,差异具有统计学意义。(P<0.001）。见表1、图2、图3。
2.2 两组外周血PMN表面CD 11b/CD 18的表达 脑梗死组外周血CD 11b/CD 18的平均抗体阳性表达率(55.598±10.356)%，显著高于正常组(20.031±0.540)%差异有显著性(P<0.001）。见表1、图2 、图3。
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