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肿瘤坏死因子 G252A C804A基因多态性与脑梗死的关系 |
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的组间比较采用χ2检验，以双侧P<0.05为有统计学显著性差异。不同基因型与疾病的关系采用Logistic回归分析，关联程度用比值比（Odds Ratio,OR）及其95%可信区间（CI）表示，以OR的95% CI不包含1为统计学上差别有显著性意义。
2 结 果
2.1 基因型的确定
2.1.1 TNFβ G252A基因型的确定 P1、P2引物扩增的产物为740 bp DNA片段，在这个片段中存在1个NcoⅠ酶切位点，可将此片段切成555 bp、185 bp两个片段。当TNFβ 3号外显子上的252号密码子发生G→A突变时，消除了NcoⅠ酶切位点。所以，当受检个体为GG型时，PCR产物经NcoⅠ酶切后琼脂糖凝胶电泳可见555 bp和185 bp两条带；若为GA杂合子，则可见740 bp、555 bp和185 bp 三条带；若为AA型时，只可见740 bp一条带（图1）。
图1 TNFβ G252A基因多态性1.5%琼脂糖凝胶电泳结果
M：DNA分子量参照（100bpDNA）1:740bp的目的基因；2：GA基因型；3：AA基因型；4：GG基因型
2.1.2 TNFβ C804A基因型的确定 P3、P4引物的唯一区别在于其最后一个碱基不同，前者为G，后者为T，两者分别与P2配对，构成两套内引物，可扩增出特异性694 bp的条带。只能被P3扩增出694 bp条带的受检个体为CC型；只能被P4扩增出694 bp条带的受检个体为AA型，既能被P3又能P4扩增出694 bp条带的受检个体为CA型（图2）。
图2 TNFβC804A基因多态性1.5%琼脂糖凝胶电泳结果
M：DNA分子量参照（100 bpDNA）1:740 bp基因片段；2、3：CC基因型；4、5：CA基因型；6、7：AA基因型
2.2 基因型频率分析
2.2.1 TNFβ C804A基因型频率分析 CI组TNFβ 804位点CC型、CA型、AA型频率分别为18.2％、47.7％、34.
1％，而对照组则分别为38.3％、42.0％、19.7％，两组比较差异有统计学意义（χ2＝9.617，P＝0.009）；CI组TNFβ 804位点C和A等位基因频率分别为42.0％、58.0％，对照组分别为59.3％、40.7％，两组比较差异有统计学意义（χ2＝9.998，P＝0.002），见表1。基因频率的相对风险分析发现，AA＋CA基因型发生CI的风险是CC型的2.101倍，95％CI为1.048~2.954。
2．2.2 TNFβ G252A基因型频率分析 CI组TNFβ G252A基因型分布(GG型34.1%、GA型40.9%、AA型25.0%) 与对照组(24.7%、46.9%、28.4%) 比较，差异无统计学意义(χ2=1.789, P＝0.409)。见表2。表1 CI组与对照组TNFβ C804A基因型频率及等位基因频率比较 表2 CI组与对照组TNF-βG252A基因型频率及等位基因频上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页
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