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Rosco纸片扩散法检测酵母样真菌对氟康唑 两性霉素B 伊曲康唑药敏试验的评价 |
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e method didnt show resistance in another detection method,and the resistant strains detected by one method yet didnt show sensitivity in another. Conclusions Rosco disk diffusion method can be used in clinical detection instead of NCCLS M27A broth macrodilution method.
【Key words】 saccharomyces; susceptibility test; antifungal medicine; drug resistance; evaluation
近年来，由于激素、免疫抑制剂及广谱抗生素的广泛应用，器官移植的普遍开展，以及艾滋病病人的不断增加，原发性及继发性免疫功能低下人群扩大，全身性真菌感染日益增多[1]，虽然将酵母菌快速鉴定到种或属对临床用药有一定的帮助[2]，但引起感染的酵母菌种类已经发生了明显的变化，耐药菌株不断产生，单纯的经验用药已远不能适应抗真菌感染的需要，因此建立一套方便可靠的真菌体外药敏试验，以指导临床合理用药已受到越来越多的关注，我们选择Rosco真菌药敏纸片扩散法对110株临床老年病例分离的念珠菌进行体外药敏试验，并与美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)宏量肉汤稀释法检测结果进行比较，现报道如下。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 菌株：自2008年6月至10月临床分离的110株酵母样真菌，病人年龄59～73岁，平均(67.3±5.6)岁，分别来自痰标本、尿液、血液、粪便、胸腹水等标本，其中白色念珠菌54株，热带念珠菌21株，克柔念珠菌12株，光滑念珠菌11株，其他念珠菌12株，均用科玛嘉显色培养基进行初步鉴定，API 20C AUX鉴定到种。
1.1.2 标准菌株：白色念珠菌 ATCC 90028，热带念珠菌ATCC 750，克柔念珠菌ATCC 6258。
1.1.3 培养基与试剂：(1) RPMI 1640 培养基：含谷氨酰胺不含碳酸氢盐，2%葡萄糖，0.165MOPS(磺酸1，4氮氧丙烷)缓冲液，调pH至7.0;(2)改进的shadomy琼脂。
1.1.4 抗真菌药物：(1)氟康唑、两性霉素B、伊曲康唑药液，使用时稀释至目标浓度;(2)氟康唑、两性霉素B、伊曲康唑Rosco药敏纸片。
1.2 方法
1.2.1 菌悬液制备：将待检菌种接种于沙保氏琼脂上，35 ℃ 24 h，挑取直径>1 mm菌落，于无菌生理盐水调整至0.5麦氏单位浓度，备用。
1.2.2 M27A宏量肉汤稀释法：按照NCCLS 1997操作指南进行，将0.5麦氏单位菌液先用无菌生理盐水1∶100稀释，再用RPMI 1640 1∶20 稀释至终浓度[(0.5×103)～(2.5×103) CFU/ml]，按每管0.05 ml加入试管浓度范围0.03～64 μg/ml，以不含药物的RPMI 1640溶液作对照管，35 ℃ 24 h后观察结果，最低抑菌浓度(MIC)终点判定：两性霉素B的MIC取肉眼清晰为判定标准，其他2种药物的MIC取50%生长抑制为判定标准。
1.2.3 纸片扩散法：用无菌棉签将0.5麦氏单位菌液均匀涂布于Shadomy琼脂平板上，待平板表面干后贴上药敏纸片，35&上一页 [1] [2] [3] [4] [5] 下一页
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