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单核细胞和血小板CD40L高表达及血小板CD62P高含量与急性冠脉综合征的关系 |
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ry syndrome and they might represent a marker of plaque unstability.
［Key words］ CD40L； CD62P ； Acute coronary syndromes
近年来研究发现CD40,CD40L参与了动脉粥样硬化（AS）的发生和发展。两者相互作用参与动脉粥样硬化斑块内主要细胞成分的炎症反应调节，其中CD40L是激活CD40L信号途径的主要配体，激活AS斑块中细胞分泌产生粘附分子、细胞因子、基质金属蛋白酶，组织因子等［1］。本文研究单核细胞和血小板CD40L表达及血小板CD62P含量与急性冠脉综合征的关系，探讨CD40L,CD62P在急性冠脉综合征发生发展中的作用。
1 资料与方法
1.1 对象：冠心病患者62例，其中稳定性心绞痛（SA）32例，不稳定性心胶痛（UA）20例，急性心肌梗死（AMI）10例，UA、SA均经冠脉造影证实，AMI有心电图和心酶谱改变，均除外血液病、肝脏病、脑血管病、肾脏病，治疗前二周未服用影响血小板功能药物（如阿斯匹林等）及钙通道阻滞剂，并除外合并感染性疾病，如严重的上呼吸道感染，肺部和胆道感染等。正常对照组45例，心电图、血脂、心肝肾功能、血常规检查均无异常,除外各系统疾病的健康人。
1.2 方法：(1)试剂及仪器：CD40_FITC、CD40L_PE、单抗、PE_CD62P单抗及FACSCalibur流式细胞仪均为美国Becton_Dickinson(B_D)公司产品。(2)流式细胞术测定单核细胞表达CD40L：标本收集和准备：109mmol/L枸橼酸钠1:9抗疑，空腹静脉取血1.8ml，2小时内染色。染色和固定：在试管上对应于每一个样本作好识别标志，分别加入50ul抗凝血及5ul单抗,低速混匀3秒种，室温避光静置20～30min，每管中加入2ml溶血素，立即低速混匀，避光室温静置10～12min，离心（300×g）5min，弃上清液，留大约50ul液体于试管中以免损伤细胞团，每管中加入0.25ml含0.1％的多聚甲醛来固定细胞，低速混匀，固定30min，上机检测。(3)流式细胞术测定血小板表达CD40L:标本收集和准备：109mmol/L枸橼酸钠1:9抗凝，空腹静脉取血1.8ml，低速离心（500×g）5min，吸取PRP50ul,以等量1%多聚甲醛室温固定15min，加3mlPBS混匀，低速离心,弃上清液，留取0.2ml液体混匀，待用，2小时内染色。染色和固定：在试管上对应于每一个样本作好识别标志，加5ul试剂到试管中，用微量移液器小心地将5ul待用PRP加到进样管的底部，低速混匀3秒种，室温避光静置20～30min，加PBS1ml，上机检测。(4)血小板CD62P检测：标本收集和准备：109mmol/L枸橼酸钠1:9抗凝，静脉取血1.8ml，低速离心（500×g）5min，吸取PRP50ul，以等量1%多聚甲醛室温固定15min，加3mlPBS混匀，低速离心，弃取上清液，留取0.2ml液体混匀。染色和固定:在试管上对应于每一个样本作好识别标志，加5ul试剂到试管中，将5ul待用PRP加到进样管底部，加PBS1ml,上机检测。
1.3 统计学处理：用SPSS11.5软件包进行统计处理，计量资料采用均数±标准差(x－±s)表示，组间比较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
UA及AMI血单核细胞和血小板表达CD40L明显较SA、NC高（P＜0.05,P＜0.01），SA与NA组相比无差异（P＞0.05），见表1。表1 各组CD40L表达水平及血小板CD62P含量注：与SA、NC组比较*P＜0.05；**P＜0.01
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