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血液病患儿骨髓细胞DNA变异的临床意义探讨

上机测定。(2)DNA测定方法:流式细胞仪FACscan(Coulter公司),15mW氩离子激光光源,发射波长488nm,每个样品测定10000个细胞,采用Coulter公司提供的DNA分析程序,获取 各样本细胞周期时相百分比。流式细胞检测方法:采用Coulter公司生产的流式细胞仪FACscan进行参数检测,每个样本随机测定10 4 个细胞,并求出细胞生长分数(%)=(S+G 2 /M)/(G 1 +S+G 2 /M)×100%,将测量的数据、图形同步输入HP-300Consort30计算机,应用相应软件程序进行资料处理。(3)倍体分析:根据DNA指数(DI)判断,本仪器DI正常范围是0.90~1.10,小于0.9为亚二倍体,大于1.10为超二倍体。

  1.3 统计学处理 采用t检验和X 2 检验。

  2 结果

  2.1 DNA异倍体检出率 白血病组异倍体检出率57.1%(24/42),其中ALL68.2%(15/22),ANLL为25%(5/20),两者比较存在显著差异(P<0.05),血液病组异倍体检出率33.3%(4/12),与白血病组比较存在显著差异(P<0.05)。正常对照组无1人检出异倍体。


  2.2 细胞周期分布 见表1。ALL及ANLL组G 0 /G 1 %均明显高于对照组(P<0.01),S%+G 2 /M%则明显低于对照组(P<0.05)。ALL组与ANLL组比较,各周期细胞分布无显著差异。血液病组DNA分析图形除了有4例异倍体外,其余均与正常对照组相似,
细胞周期分布各值与正常对照组比较无显著差异。1 各组的骨髓细胞周期分布 注:与对照组比较ˇP<0.05

  3 讨论

  近年来,FCM广泛应用于肿瘤细胞学的临床诊断,人体正常的细胞具有较恒定的DNA二倍体含量,当人体癌变及具有恶性潜能的癌前病变时,在其发生、发展过程中可伴随细胞DNA含量的异常改变 [1] 。本文结果表明,白血病异倍体检出率为57.1%(24/42),血液病患儿异倍体检出率为33.3%(4/12),两组存在显著差异。经追踪,4例异倍体初诊为非白血病中,1例CITP转变为骨髓增生异常综合征(MDS),1例AA发病为ANLL。因此,初诊为血液病的患儿,临床进行骨髓细胞形态学检查的同时,应用FCM检测其骨髓MNC的DNA含量,对DNA含量异常的非白血病患儿,应高度注意其癌变的可能。

  本资料显示,白血病异倍体检出率显著高于非白血病组,因此DNA倍体改变在AL中极其常见,而且ALL的DNA异倍体检出率明显高于ANLL组,从遗传学角度分析AL的发病机制表明ANLL患儿的染色体异常较多地表现为结构异常,而不是数目的异常,还可能是临床上ANLL较ALL缓解率低的原因之一。此外,本文接受治疗的8例ALL中6例达到完全缓解(CR),其中4例为超二倍体,另2例分别为二倍体和亚二倍体,提示超二倍体患儿的CR率高,预后较好,与多数文献报道一致 [2,3] 。

  细胞周期中S期比例代表该细胞群体中增殖细胞的数 量,从侧面反映细胞的增殖状态,本文AL组骨髓细胞的G 0 /G%明显高于正常对照组,而S%及S+G 2 /M%明显低于对照组,说明了白血病骨髓细胞从G 0 /G 1 期至S期之间存在运行阻滞,表明白血病骨髓细胞的增殖能力低于正常。追踪结果发现同一患者在不同病期的白血病细胞增殖状况不同,3例ALL达到CR后,其S%(分别为30.2%,28.5%,26.3%)和S+G 2 /M%(分别为35.3%,30.2%,33.5%)均明显高于初诊时的S%(分别为10.5%,12.4%,13.1%)和S+G 2 /M%(分别为9.5%,13.8%,20.6%),说明AL患儿CR后各期比例恢复正常,骨髓造血功能恢复,我们将继续应用FCM定期测定AL患儿骨髓细胞周期分布,了解细胞增殖状态,施以相应的治疗,提高治疗AL的疗效。

  参考文献

  1 Barlogie B,Drewindo B,Schumann J,et al.Cellular DNA content as a marker of neoplasia in man.Am J Med,1998,80(1):195-200.

  2 Stary J,Hrodek O,Harsner P,et al.The importance of blast cell DNA content for prognosis of childhood acute lymphoblastic leukemia.Neoˉplasma.1999,4

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